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本文采用回顾性研究、成分分析及体外细胞实验相结合的方法,评价解毒通络调肝方（Jiedu Tongluo Tiaogan Formula,JTTF）改善2型糖尿病（type 2 diabetes mellitus,T2DM）患者的临床疗效,以及探索该方药效的物质基础和生物学内涵,为JTTF治疗T2DM的临床应用和机制研究提供数据支撑和科学依据。目的:1.通过回顾性研究方法观察符合纳入标准的T2DM患者,评价JTTF改善患者临床症状和糖脂代谢指标等的情况,评价其临床疗效,为临床运用提供客观依据,以期在临床上为应用JTTF治疗T2DM时的思路及方法提供参考与借鉴。2.通过建立JTTF的质量控制方法,明确其药效组分的主要组成及稳定性,并为后续的生物学机制研究提供可靠的实验基础。3.采用细胞模型研究JTTF对大鼠胰岛瘤细胞（INS-1细胞）的保护作用,以及对内质网应激、过度自噬的影响,系统阐明该方保护胰岛功能的分子机制,为该方治疗T2DM的分子机制提供理论与实验依据。方法:1.通过回顾性分析符合纳入标准的患者283例,分别记录患者在入组和出组时的基本信息情况,以及空腹血糖、餐后血糖、糖化血红蛋白、BMI、脂代谢、主症等综合分析有效性,探讨JTTF治疗T2DM的疗效分析。2.采用UPLC-Q-TOF-MS法分析JTTF的主要组成及稳定性;接着,使用JTTF中药冻干粉制剂干预高糖诱导的INS-1细胞,利用MTT、GSIS、Western Blot、q-PCR等方法来分析该方对细胞糖毒性的保护作用;最后,利用Western Blot、q-PCR、流式细胞术、荧光化学法等研究该方对高糖诱导的INS-1细胞内质网应激、过度自噬的影响,系统阐明该方保护胰岛功能的分子机制。结果:1.通过对服用JTTF患者的糖脂代谢、BMI、临床症状情况的观察,治疗3个月后,从数据分析中显示,JTTF能够改善患者的FBG、2h PBG、Hb A1c和脂代谢,同样还具有一定的减轻体重的作用,同时对患者的临床不适症状,尤其是肝胃郁热的主症,有较好的改善,为JTTF的推广提供临床证据,同时也丰富了中医药治疗T2DM的临床经验。2.通过UPLC-Q-TOF-MS方法对JTTF化学成分进行定性分析,共推测出28种化学成分,其中包括黄酮类6种、苯丙素类4种、萜类4种、皂苷类3种、碱类3种、蒽醌类2种、有机酸类2种、氨基酸类2种、醛类1种。同时对JTTF中的28种化学成分进行定性鉴别,结果显示,黄酮类化合物主要源自黄芪和榛花,皂苷类化合物主要源自丹参和黄芪,萜类化合物主要源自丹参,苯丙素类化合物主要源自黄芪、柴胡,有机酸类化合物主要源自榛花,氨基酸类化合物主要源自丹参和黄芪,醛类化合物主要源自柴胡。本研究采取UPLC-Q-TOF-MS技术来分析JTTF中化学成分的定性分析,此方法高效、便捷,为JTTF的质量控制方法和药物稳定性研究的提升提供了科学依据。3.当用25至500μg/m L的JTTF孵育INS-1细胞48小时,不影响INS-1细胞的存活率,说明JTTF无毒性作用;通过对高糖浓度的筛选,最终确定最佳造模浓度为20m M;通过GSIS实验得出结论,JTTF可以改善β细胞胰岛素分泌,保护胰岛功能;通过对胰岛素基因（INS1、INS2）及胰岛素基因调控因子PDX1及Maf A的基因与蛋白的表达,结果显示,高糖可以抑制其基因与蛋白的表达,而JTTF可以增加其m RNA和蛋白的表达（P＜0.01）,这表明JTTF对高糖诱导的胰岛β细胞胰岛素合成与分泌具有保护作用。4.在高血糖条件下,相关的持续内质网应激（Endoplasmic reticulum stress,ERS）会导致β细胞内Ca2+水平升高,高糖诱导的内质网中Ca2+转运功能障碍导致β细胞持续ERS,进一步导致胰岛β细胞的功能障碍,而JTTF能够抑制其细胞内Ca2+的释放（P＜0.01）,保持细胞内稳态;同时,在高糖的环境里,Ca2+转运功能障碍,大量Ca2+外流,Camkkβ被激活,导致胰岛β细胞的损伤,而其损伤能够被JTTF所抑制（P＜0.05）;最后,在高糖的刺激下,胰岛β细胞产生ERS,使PERK、IRE1α、ATF-6与GRP78分离,触发GRP78、PERK、IRE1α和ATF-6蛋白的长期强烈表达,可导致胰岛β细胞功能障碍,JTTF干预后可显著降低GRP78、p-IRE1α、ATF6、p-PERK的蛋白表达（P＜0.01）,进而降低胰岛β细胞的功能障碍。5.在持续的高血糖状态下,诱发胰岛β细胞内发生持续的ERS,导致过度自噬发生。通过使用Western blot分析监测β细胞中几种自噬相关蛋白（m TOR、ULK1、Beclin-1、LC3、p62）的水平,结果显示,JTTF治疗能够抑制过度自噬并保护β细胞免受高糖诱导的损伤（P＜0.01）;接着,使用荧光化学法评估β细胞中OA染色自噬体的水平。AO染色结果显示,与对照组相比,48小时接触高糖的模型组细胞中观察到的自噬空泡显著增加,红色荧光增强。JTTF处理后,随着JTTF浓度的增加,自噬空泡呈剂量依赖性减少,红色荧光减弱（P＜0.05）。同时利用自噬的激活剂AICAR,同样验证了该方抑制过度自噬的效果。结论:1.本研究通过回顾性分析,阐明了JTTF是治疗T2DM的临床有效方剂,值得推广应用。2.JTTF的药物组分共鉴定出28种,进一步明确了该方的药效成分和药物作用的稳定性。3.在体外实验方面,验证了该方对胰岛β细胞的糖毒性的保护作用。4.JTTF对胰岛β细胞的糖毒性的保护作用可能是通过抑制ERS和细胞过度自噬,保持细胞内稳态。