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研究目的分析人体肝细胞癌组织和癌旁肝组织中骨桥蛋白(osteopontin, OPN)和CD44V6蛋白、β-连环素(β-catenin)和上皮钙黏连素(E-cadherin)的表达特征,探讨以上蛋白的表达与肝癌临床病理因素,特别是转移之间的相关性。研究方法以临床手术切除的原发性肝细胞癌和癌旁肝组织作为研究材料。应用光学显微镜、免疫组织化学、核酸原位分子杂交、细胞图像分析和免疫电镜等实验手段,系统地观察了多种蛋白质包括OPN、CD44V6、β-catenin和E-cadherin在原发性肝细胞癌及其癌旁肝组织中的表达状况,并分析它们与肝细胞癌组织分级、分型和门静脉有无癌栓等临床病理因素之间的相关性。结果一、免疫组织化学染色结果1、OPN和CD44V6在肝细胞癌及癌旁肝组织中的表达①OPN阳性染色在肝癌中主要定位于癌细胞胞质,为胞质内的棕黄色颗粒。未见胞核或胞膜着色。本组肝癌中共有28例OPN表达阳性,阳性表达率为93.3%(28/30)。在癌结节周边和一些离散的癌细胞胞质内,OPN往往呈强阳性表达。14例肝癌中还可观察到浸润在肝癌组织中的炎性细胞也呈阳性表达,表达部位在胞浆,有的甚至强于癌细胞中的表达。在癌旁肝组织中也可见OPN在胞浆中的阳性表达,阳性率为96.67%(29/30)。经统计学分析,两组的阳性表达强度存在差异,即肝癌组的平均光密度高于癌旁肝组织组(因透明细胞型肝癌的癌细胞胞浆空亮,难以判定表达情况,故除去此型),差异有显著性(P<0.05)。但两组的阳性表达率差异无显著性(P>0.05)。②CD44V6在肝癌组织中的阳性染色主要定位于癌细胞胞质,表现为棕黄色颗粒。30例肝癌组织中共有18例有阳性表达,阳性表达率为60%。而癌旁肝组织中同样发现有CD44V6蛋白的阳性表达,部位也在胞浆,阳性表达率为70%(21/30)。经统计学分析,两组的阳性表达强度存在显著差异:即肝癌组平均光密度高于癌旁肝组织组(P<0.05)。但两组的阳性表达率差异无显著性(P>0.05)。③OPN和CD44V6的表达与肝细胞癌(hepatocellular carcinoma, HCC)临床病理因素之间的关系:OPN和CD44V6在不同的组织分级组和病理类型组的表达强度(平均光密度)都有显著性差异(P值均小于0.05),两者均在梁索型中的表达强度最高,且伴有门静脉癌栓组中的平均光密度显著高于不伴门静脉癌栓组(P<0.05)。在不同组织学类型组和有无门静脉癌栓组中,随着OPN平均光密度的升高,CD44V6的平均光密度亦上升,两者的表达呈正相关(P<0.05)。2、β-catenin和E-cadherin在肝细胞癌及癌旁肝组织中的表达①在癌旁肝组织中,β-catenin蛋白的阳性表达主要定位于肝细胞膜,呈棕黄色的线性染色,尤其是细胞连接处,部分在近胞膜的胞浆处也可见棕黄色颗粒状的阳性表达,未见胞核着色。30例癌旁肝组织中共有25例β-catenin表达阳性,阳性率为83.33%(25/30)。而在肝癌组织中,β-catenin蛋白的胞膜表达出现不同程度的缺失,而胞浆表达明显增多,尤其是靠近胞核处,往往可见呈棕黄色粗颗粒状的强阳性表达,甚至可见核表达。在肝癌组中有24例β-catenin蛋白表达阳性,阳性率为80%(24/30)。经统计学分析,β-catenin蛋白的阳性表达强度存在组间差异,即肝癌组的平均光密度高于癌旁肝组织组,差异有显著性意义(P<0.05)。但两组的阳性表达率无显著性差异(P>0.05)。②在30例癌旁肝组织中,有26例强阳性表达E-cadherin,阳性率为86.67%(26/30),主要为癌旁肝细胞膜上棕黄色线性着色,尤其是细胞连接处,少见细胞浆或胞核着色。而在30例癌组织中,只有10例可发现少量胞膜的阳性表达,阳性表达率为33.33%(10/30)。经统计学分析,E-cadherin蛋白的阳性率和表达强度均显示组间差异,即癌旁肝组织组高于肝癌组,差异有显著性意义(P值均小于0.05)。③β-catenin和E-cadherin的表达与有无门静脉癌栓之间的关系:β-catenin在有门静脉癌栓组中的平均光密度高于无门静脉癌栓组,差异有显著性意义,而E-cadherin则相反(P值均小于0.05)。二、OPN在原发性肝细胞癌组织中的亚细胞定位免疫电镜结果表明:OPN蛋白阳性的胶体金颗粒主要定位于肝癌细胞的粗面内质网,其他部位和癌旁肝组织组中仅有极少量胶体金颗粒散在分布。本组免疫电镜的超薄切片上未发现炎性细胞内有OPN蛋白阳性的胶体金颗粒。三、原位分子杂交结果E-cadherin的mRNA阳性表达定位于癌旁肝细胞浆内,呈紫蓝色,癌细胞内为阴性或极弱表达。其阳性率和表达强度均显示组间差异,即癌旁肝组织组高于肝癌组,差异均有显著性意义(P值均小于0.05)。结论1. OPN在肝癌组织中呈过表达状态,其主要在肝癌细胞的粗面内质网上合成,与门静脉内有无癌栓等临床病理因素有关,并与CD44V6的表达呈正相关。因此,OPN可能通过CD44V6在肝癌转移过程中起重要作用。2.β-catenin在肝癌组织中的表达部位与癌旁肝组织相比,发生明显变化,即胞膜表达出现不同程度的缺失,而胞浆表达明显增多;E-cadherin的蛋白和mRNA在肝癌组织中的表达明显下降。两者的改变与门静脉内有无癌栓等临床病理因素有关。因此β-catenin在肝癌组织中的异位表达、过表达和E-cadherin的表达下降在肝癌转移过程中可能起重要作用。