BRCA基因的克隆,表达与纯化

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乳腺癌是女性常见的恶性肿瘤之一,全世界每年确诊患有乳腺癌疾病的妇女就高达100多万人。乳腺癌根据遗传与否,可分为散发性乳腺癌和家族遗传性乳腺癌。通过对大量乳腺癌病例进行研究分析,发现遗传性乳腺癌患者占乳腺癌患者的5%-10%。对高危遗传性乳腺癌家庭的进一步深入研究,发现了两种乳腺癌易感基因BRCA1和BRCA2。虽然现在普遍认为BRCA1和BRCA2属于抑癌基因,与同源重组、DNA损伤修复和转录调控等有关,但其具体作用机制仍不是很清楚,有待进一步研究。   众所周知,特异性良好的抗体是研究蛋白质表达水平与功能的基础。为了得到对BRCA基因进行更深一步研究所需的抗体,我们进行了如下基础工作,首先分别克隆了BRCA1基因和BRCA2基因的一个片段,构建其原核表达载体,后将构建好的原核表达载体转化大肠杆菌并诱导表达,获得了融合蛋白,并对融合蛋白进行亲和纯化。将纯化后的融合蛋白作为抗原免疫BALB/c小鼠。免疫完成后应用ELISA方法检测抗血清效价。随后又构建了真核表达载体转染293T细胞,利用我们所获得的鼠抗血清检测转染293T细胞后的BRCA基因的外源过表达。经过ELISA和Western Blot检测,证实免疫后的BALB/c小鼠血清能够检测我们所克隆和表达的BRCA基因。   本文的主要意义在于为BRCA基因的深入研究做了前期的准备工作。
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