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随着水产贸易的发展,传染性造血器官坏死病(IHN)、鲤春病毒血症(SVC)从世界局部范围流行发展到各国都有爆发报道,成为危害全球范围水产养殖业较为严重的病害。本研究通过制备的单克隆抗体和多克隆抗体建立了两种主要水生动物病毒——传染性造血器官坏死病毒(IHNV)、鲤春病毒血症病毒(SVCV)的免疫纳米晶试纸条的快速检测方法。 筛选出两种病毒亲和性较好的单克隆抗体(I3A9、S4F9),将制备的单抗与表面修饰的荧光纳米晶颗粒进行共价偶联,试验表明与50μL1mg/mL荧光纳米晶颗粒共价偶联的最佳单抗量为150μg,进而利用单抗标记的荧光纳米晶材料制备样品垫。将纯化的多抗喷涂在硝酸纤维素膜的检测区作为检测线,用兔抗鼠IgG作为硝酸纤维素膜上的质控线包被抗体,浓度均配制为1 mg/mL后喷制检测线和质控线,利用以上材料组装成了荧光纳米晶发光试纸条。 利用荧光纳米晶颗粒快速检测试纸对不同稀释度的IHNV和SVCV病毒液进行检测,结果发现浓度在5 ng/mL以上的样品均为阳性结果,检测浓度1 ng/mL样品为可疑,条带模糊不清,从而表明该试纸条的检测灵敏度至少能达到5 ng/mL。使用试纸条检测狗鱼弹状病毒(PFRV)、牙鲆弹状病毒(HRV)、传染性胰脏坏死病毒(IPNV)、病毒性神经坏死病毒(VNNV)、鰤鱼腹水病毒(YAV)、草鱼呼肠孤病毒(GCRV)和锦鲤疱疹病毒(KHV)等鱼类病毒,均无交叉反应,表现出良好的特异性。对随机挑取的3个不同批次间的试纸条进行重复试验,每一批次挑取10个试纸条分别对阳性样品和阴性样品进行检测,结果完全一致。取30个同一批次的试纸条,分别对阳性样品和阴性样品进行3次重复检测,结果完全一致,说明试纸条重复性良好。将同一批次的试纸条在4 ℃条件下保存不同时间后进行检测,结果表明,于4℃保存六个月具有良好的稳定性。将临床采集的215份鱼类样品和自制的盲样分别使用IHNV、SVCV试纸条进行检测,并与PCR法进行比较,这两种方法的符合率分别是98.60%、98.33%。 本论文制备的试纸条操作简单、携带方便、不需要特殊试验条件,结果客观、易于判读,可以满足现场检测的需要,达到显著降低检测成本,大大缩短检验周期,提高口岸通关速度和疫病监测效率的目的,为我国疫情疫病的监测、预警和控制提供坚强的技术支持。