【摘 要】
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目的:结直肠癌（colorectal cancer,CRC）是世界上常见的恶性肿瘤之一,死亡率仅次于肺癌。甲基莲心碱（neferine,nef）是从莲心提取出来的一种双苄基异喹啉类生物碱,具有良好的抗肿瘤特性,但其作用机制研究尚不清楚,在结肠癌方面研究也较少,故本课题拟深入研究甲基莲心碱在结肠癌细胞的作用机制。方法:MTT实验检测甲基莲心碱的IC50值,设计药物浓度梯度;药物处理SW480、HCT
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目的:结直肠癌（colorectal cancer,CRC）是世界上常见的恶性肿瘤之一,死亡率仅次于肺癌。甲基莲心碱（neferine,nef）是从莲心提取出来的一种双苄基异喹啉类生物碱,具有良好的抗肿瘤特性,但其作用机制研究尚不清楚,在结肠癌方面研究也较少,故本课题拟深入研究甲基莲心碱在结肠癌细胞的作用机制。方法:MTT实验检测甲基莲心碱的IC50值,设计药物浓度梯度;药物处理SW480、HCT116结肠癌细胞株48 h,通过细胞增殖实验、平板克隆实验检测甲基莲心碱对结肠癌细胞的增殖的影响;通过流式细胞术、Hoechest 33258染色检测甲基莲心碱对结肠癌细胞凋亡的影响;通过划痕实验、Transwell小室实验、Western Blot实验检测甲基莲心碱对结肠癌细胞的侵袭、迁移的影响;通过网络药理学筛选出甲基莲心碱的靶基因以及相关信号通路;通过Western Blot实验验证磷酸肌醇-3-激酶调节亚基2（Phosphoinositide-3-kinase regulatory subunit 2,P85β）和PI3K/Akt信号通路。结果:1.MTT实验结果显示甲基莲心碱在SW480和HCT116中的IC50值分别23.45μmol/L和22.26μmol/L;细胞增殖实验、平板克隆实验结果显示甲基莲心碱以浓度和时间依赖性抑制结肠癌细胞的增殖。2.流式细胞术、Hoechest 33258染色结果显示甲基莲心碱以浓度依赖性促进结肠癌细胞的凋亡。3.划痕实验、Transwell小室实验、Western Blot结果显示甲基莲心碱能有效抑制N-cadherin、Vimentin、Snail、Slug的蛋白表达,促进E-cadherin表达,甲基莲心碱能显著抑制结肠癌细胞侵袭、迁移能力。4.P85β在结肠癌细胞中高表达,甲基莲心碱以浓度依赖性抑制P85β的表达,同时也抑制PI3K和Akt的磷酸化和非磷酸化蛋白水平表达。结论:1.甲基莲心碱能有效抑制结肠癌细胞的增殖。2.甲基莲心碱能促进结肠癌细胞的凋亡。3.甲基莲心碱能显著抑制结肠癌细胞的侵袭、迁移。4.P85β在结肠癌细胞中高表达,甲基莲心碱可能通过抑制P85β调控PI3K/Akt信号通路。
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