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第一部分健脾化湿解毒方对痛风肾大鼠肾功能及肾小球纤维化的影响 目的:研究健脾化湿解毒方对于痛风肾大鼠肾功能及肾小球的保护作用及“治未病”中的作用 方法:1.Wista大鼠进行腺嘌呤造模6周;2.在造模进行同时即未形成痛风肾模型程度时加予别嘌醇(西药对照组)与中药健脾化湿解毒方(中药治疗组)进行中西药分别灌胃治疗,治疗周期为6周;3.待完毕后处死大鼠,提取血清与摘取肾脏,测取血清中血尿酸、胱抑素、肌酐、尿素氮的含量、肾脏HE、马松染色,检测各组肾小球的坏死及纤维化情况,观察健脾化湿解毒方早期干预对于痛风肾大鼠肾功能及肾小球的保护作用。 结果:1.痛风肾型大鼠血清中血尿酸、胱抑素均明显高于空白对照组,中药健脾化湿解毒方治疗组及对照组的大鼠与造模组相比,血尿酸、胱抑素均有明显下降,空白组、造模组、对照组与中药健脾化湿解毒方组各组间治疗前后血肌酐、尿素无明显差异;2.痛风肾型大鼠肾脏切片显示肾小球及间质中胶原分泌明显多于空白对照组,中药健脾化湿解毒方治疗组及西药对照组的大鼠与造模组相比,胶原分泌有所减少。 结论:健脾化湿解毒方早期及持续干预能降低大鼠腺嘌呤造模引起的尿酸、胱抑素增高;并能减少大鼠痛风性肾病引起的肾小球及间质胶原分泌异常,具有肾功能保护作用。 第二部分健脾化湿解毒方对于尿酸刺激下肾小球系膜细胞的增殖、纤维化相关因子表达的影响 目的:研究健脾化湿解毒方含药血清对尿酸刺激下肾小球系膜细胞的增殖、纤维化相关因子表达的影响,揭示中药含药血清在分子生物层面上干预作用。 方法:1.培养肾小球系膜细胞(GMC);2.尿酸刺激GMC细胞,同时用含有别嘌醇(西药对照组)及健脾化湿解毒方的含药血清(中药治疗组)分别加入细胞中,用CellCounting Kit检测各组别细胞的活性;用Western Blot检测细胞蛋白中磷酸化细胞外蛋白调节激酶(p-ERK)、细胞周期蛋白D1(cyclinD1)的含量;用共聚焦及Real-Time PCR检测细胞中纤维粘连蛋白(FN)、胶原Ⅰ型(CollagenⅠ)的表达及分布情况,观察健脾化湿解毒方对于尿酸刺激下肾小球系膜细胞的增殖、纤维化是否具有保护作用。 结果:1.尿酸300μmol/l刺激GMC后,细胞活性(CCK8)明显下降、p-ERK通路表达明显升高,其下游细胞周期蛋白被抑制,细胞中FN的表达升高、CollagenⅠ的表达下降;在加入含别嘌醇及健脾化湿解毒方的含药血清后,细胞活性(CCK8)被进一步遏制;健脾化湿解毒方的含药血清能使细胞周期蛋白恢复至正常、而其上游ERK通路与空白对照组相比并无明显差异;健脾化湿解毒方的含药血清能降低经尿酸刺激后FN的分泌、对CollagenⅠ的表达并无明显作用。 结论:1.健脾化湿解毒方含药血清能减轻尿酸刺激细胞后细胞周期蛋白的抑制及抑制FN的异常分泌;2.对尿酸刺激下p-ERK通路的增高、CollagenⅠ的分泌减少和细胞活性降低无明显作用。