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非酒精性脂肪肝(Nonalcoholic fatty liver disease, NAFLD)是指由非酒精因素引起的肝内严重的脂肪变性。超重与肥胖、高脂血症等是非酒精性脂肪肝的主要病因。早期诊断、调节饮食、增加运动锻炼、加强治疗为预防和控制非酒精性脂肪肝的重要措施。 非酒精性脂肪肝包含一系列与肝内脂肪蓄积相关的病征,其发病机制错综复杂,研究认为非酒精性脂肪肝与脂质代谢异常、胰岛素抵抗、肥胖和代谢综合征等密切相关,其中脂质代谢异常被广泛认为是其发病的最主要和最基本机制之一。低密度脂蛋白受体(low density lipoprotein receptor, LDLr)和清道夫受体B族I型(scavenger receptor class B type I, SR-BI)及甲状腺激素受体β1(thyroid hormone receptorβ1, TRβ1)在肝脏调控脂质代谢过程中发挥重要作用。 白藜芦醇是一种生物学效应非常广泛的植物多酚,其功效包括减少脂质合成、抗炎、延长寿命等,有着治疗多种慢性病的巨大潜力。 本实验采用高脂高糖喂养大鼠形成非酒精性脂肪肝,研究白藜芦醇对NAFLD的改善作用及作用机制(对TRβ1,LDLr和SR-BI表达的影响),为防治NAFLD提供新的思路。 本文从以下两部分就白藜芦醇改善大鼠非酒精性脂肪肝的机制研究进行了综述。 第一部分:白藜芦醇对大鼠非酒精性脂肪肝的改善作用 目的:高脂高糖饲料喂养 Wistar雄性大鼠,建立非酒精性脂肪肝的动物模型,观察白藜芦醇(resveratrol, Res)对非酒精性脂肪肝的改善作用。 方法: Wistar雄性大鼠40只,随机平均分成4组:正常组(Control),高脂高糖组(HFS),两个白藜芦醇剂量组(HFS+Res1,HFS+Res2),剂量分别为50、100 mg/kg·bw。采用高脂高糖喂养方式建立大鼠非酒精性脂肪肝模型,实验期间准确记录体重、进食量等指标。基础饲料由华中科技大学同济医学院实验动物学部提供,基础饲料供能比为:蛋白质26.48%,脂肪10.19%,碳水化合物63.33%。高脂饲料供能比为:蛋白质18.33%,脂肪54.22%,碳水化合物27.45%(其中蔗糖7.8%)。13周末每组断头处死7只大鼠并检测血清及肝匀浆总胆固醇(TC)、总甘油三酯(TG)含量;每组其余3只大鼠取出肝脏进行HE染色和油红O染色。 结果:高脂高糖组大鼠体重、能量利用率、血清及肝脏 TC和TG明显高于正常组,而白藜芦醇干预有显著的改善效果;HE染色和油红O染色能明显观察到高脂高糖组大鼠肝细胞明显的脂肪变性,而白藜芦醇各剂量组均得到了明显的改善。 结论:高脂高糖喂养能引起大鼠肝脏严重的脂肪变性,引发非酒精性脂肪肝,而白藜芦醇干预能起到明显的改善作用。 第二部分:白藜芦醇改善大鼠非酒精性脂肪肝的机制研究 目的:探究白藜芦醇改善大鼠非酒精性脂肪肝过程中血清甲状腺激素(TH)的变化,以及白藜芦醇对甲状腺激素受体β1(TRβ1),低密度脂蛋白受体(LDLr)和清道夫受体B族I型(SR-BI)表达的影响。 方法:使用夹心法酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒测定大鼠血清FT3和FT4含量。用TRIzol提取肝脏的总RNA,应用Real-Time RT-PCR检测大鼠肝脏组织TRβ1,LDLr和SR-BI mRNA的表达水平;用RIPA裂解液充分匀浆裂解提取肝脏总蛋白,用Western blot方法检测这三种基因的蛋白表达水平。 结果: (1)各组大鼠血清FT3、FT4之间无显著性差异。 (2)白藜芦醇能提高NAFLD大鼠肝脏LDLr和SR-BI mRNA和蛋白表达的水平,但是白藜芦醇干预对TRβ1 mRNA和蛋白的表达均无影响。 结论: (1)白藜芦醇可能并未通过改变甲状腺激素的含量来改善非酒精性脂肪肝。 (2)白藜芦醇对大鼠非酒精性脂肪肝的改善作用可能是通过提高LDLr和SR-BI的表达来实现的,但此过程中LDLr和SR-BI不受TRβ1的调节,但还需进一步研究。