早产是常见的妊娠并发症,占整个妊娠的5 %～15 %,占新生儿死亡的70 %,新生儿病率的75 %。多年来早产的发生率并未降低,目前临床上尚无可靠预测早产的诊断指标,也缺乏有效的治疗措施。目前对早产的研究大部分仍致力于阐明分娩的发生机制,特别是分娩发动过程中的生化改变,希望借以找到更好的预测和治疗早产的有效方法。前列腺素可以改变胎膜结构、促进宫颈成熟和引发子宫收缩,是分娩发生的最重要的刺激因素。PGHS-2是前列腺素合成的限速酶,它将花生四烯酸转变为前列腺素前体—PGG2或PGH2,从而形成各种形式的前列腺素、前列环素、血栓烷。PGHS-2是一种诱导型分子,它的表达受到严密的调控,在外界刺激因素如IL-1β、LPS等作用下,细胞内相关信号通路如MAPK、NFκB被激活,从而活化转录因子,后者进入细胞核,与细胞核中的调控元件结合从而促进转录。PGHS-2表达上调的调节机制较复杂,不同类型的组织,不同类型的刺激,PGHS-2表达调控机制差别明显。在妊娠期PGHS-2主要存在于子宫平滑肌细胞和子宫内膜细胞,分别具有诱发分娩和维持妊娠的作用。随着分娩的临近及发动, IL-1β等炎症因子激活MAPK及NFκB信号,引起PGHS-2表达显著上调,前列腺素合成增加,刺激子宫肌细胞收缩,导致分娩的发生。早产是由各种因素引起的分娩的过早发动,即子宫由静息期向激活期的过早转化,因此,PGHS-2的表达及其调控特点在早产和足月产可能存在差异。本研究通过对PGHS-2在早产子宫肌中的表达和调控特点进行初步探讨,为进一步揭示早产发生机制提供了理论基础。为了明确早产中PGHS-2的表达及调控特点,本研究选取早产临产(PTL)与未临产(PTNL)孕妇做为研究组,足月临产(TL)与未临产(TNL)孕妇做为对照组,活检取子宫下段肌层组织,免疫组化-免疫荧光对PGHS-2在子宫肌中的表达进行了形态学观察,通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)及Western blot法检测子宫肌层中PGHS-2、IL-8、OTR等分娩相关因子mRNA及蛋白的表达,通过酶联免疫吸附实验(ELISA)检测子宫肌层中前列腺素PGE2的含量,并结合临床资料对检测结果进行统计学分析。同时,分我们通过Western blot分析早产子宫肌层组织中PGHS-2相关信号通路MAPK及NFκB蛋白分子的表达,通过分离培养子宫平滑肌细胞,观察前列腺素对NF-kB的表达及激活的影响。我们随机选取西南医院2008年7月～2010年4月剖宫产分娩的妊娠32～36+6周早产孕妇及同期37～41+6周足月孕妇80例。通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)及Western blot法检测了子宫肌层中PGHS-2、IL-8、OTR等分娩相关因子mRNA及蛋白的表达。结果显示,PGHS-2 mRNA及蛋白水平在早产与正常足月产存在显著的差异,在早产妊娠时明显高于足月产妊娠,而在早产临产时,其在子宫肌层中的表达又明显低于足月临产。我们的结果提示早产子宫平滑肌中PGHS-2的表达调控特点可能与足月产中存在差异。酶联免疫吸附实验(ELISA)检测早产未临产和足月未临产子宫肌层中前列腺素PGE2的含量。结果显示在早产未临产和足月未临产中PGE2都有表达,且前者显著高于后者,提示早产未临产中PGHS-2的上调可以促进PGE2的合成增加。我们取新鲜的早产未临产及足月未临产子宫肌层组织,对磷酸化的JNK1/2/3、p38、ERK1/2激酶的水平以及NFκB p65以及IkBa蛋白的表达水平进行了Western blot检测。结果显示,在早产未临产子宫肌层组织中,MAPK信号通路中的JNK1/2/3与p38激酶的磷酸化水平显著高于足月未临产,而ERK1/2的磷酸化水平与之未见显著差别。NFκB p65以及IkBa的表达水平在早产与足月产之间未见显著差异,提示PGHS-2表达的上调可能是通过MAPK信号通路中的JNK1/2/3与p38实现的。为了分离培养及鉴定子宫平滑肌细胞的,取新鲜的子宫肌层组织,用眼科小剪刀反复切碎组织为2mm×2mm×2mm大小,将组织吸入离心管,加入培养液5ml (含0.2 %胶原酶Ⅱ),37℃水浴振荡消化约12～16h。离心去上清液,加含20% FBS的DMEM培养基(含青霉素100U/ml及链霉素0.1mg/ml)吹打混匀后接种细胞培养板,37℃5% CO2培养箱静置1～2d ,细胞伸展贴壁呈梭形生长,约8～10d细胞达到90%融合时,即可传代。激光共聚焦显微镜下观察培养细胞中α-actin的表达。结果显示,我们分离培养的子宫平滑肌细胞贴壁生长,呈梭形,显著表达α-actin蛋白,提示分离培养成功。为了检测PGE2对子宫肌细胞NF-kB信号通路的影响,首先用PGE2刺激子宫平滑肌细胞8h、16h、24h,Western blot检测细胞中NFκB p65蛋白的表达;然后用IL-1β和LPS分别去刺激用PGE2刺激或没有刺激的子宫平滑肌细胞,激光共聚焦观察NFκB p65的核转移情况。结果显示PGE2能够明显抑制NFκB p65蛋白的表达,在16h时最显著。PGE2能够显著抑制由IL-1β和LPS刺激引起的NFkB p65分子向核内的转移,提示PGE2在体外能显著抑制子宫平滑肌细胞中NFκB p65的表达。PGE2能抑制IL-1β、LPS引起的子宫平滑肌细胞中NFκB p65的向核内的转移,显示在妊娠过程中,PGHS-2可能通过调节前列腺素的合成来参与调控NFκB信号通路的激活。以上研究提示PGHS-2的表达及调控在早产和足月产中存在显著的差别,为进一步阐明分娩及早产的发生机制提供了理论支持。