大鼠急性心梗后梗死周围区功能蛋白的表达及其在间充质干细胞心肌归巢中的作用分析—蛋白质组学研究

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目的应用差异蛋白质组学方法,研究急性心肌梗死(AMI)后间充质干细胞(MSCs)归巢的目标区域-梗死周围区中功能蛋白的表达变化,了解其参与调控的MSCs心肌归巢的分子机制。方法结扎大鼠左前降支制作急性心梗模型,先后建立对照组、心梗后1d、4d和10d组。分别观察四组大鼠心脏的组织病理学变化。以二维凝胶电泳对大鼠梗死周围区或相应区域的心肌蛋白进行分离,筛选、鉴定出其中表达变化符合心梗后MSCs心肌归巢时间变化趋势的蛋白点,然后对蛋白功能进行生物信息学分析,寻找出其中功能与归巢过程可能相关的蛋白。蛋白质组学结果以western免疫印迹和免疫组化方法验证。结果实验显示,AMI后大鼠心脏组织病理学变化具有明显的时间规律和区域特征。AMI后梗死周围区中发生明显差异表达的蛋白点中,符合MSCs心肌归巢时间变化规律的蛋白点有42个,其中鉴定出32个,对应于29种蛋白。其后我们选择了其中的3个蛋白CRMP2、prohibtin和cofilin-1进行了蛋白定位(免疫组化)和表达(western blotting)研究,结果与蛋白质组学基本相符。生物信息学分析显示,这些差异蛋白可按功能分为5类:骨架蛋白,应激相关蛋白,能量代谢相关蛋白,炎症反应蛋白及其他,其中的CRMP2;PP2A,subunit B,B-alpha isoform和RACK1可能与MSCs的心肌归巢相关。结论差异蛋白质组学方法可能成为MSCs心肌归巢研究的一个新的有力工具。本研究提示CRMP2,PP2A,subunit B,B-alpha isoform和RACK1可能作为重要的功能蛋白参与了MSCs的心肌归巢的调控。
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