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复配生物杀虫剂BT-阿维菌素(BtA)目前在全国的使用量越来越大,长时间大剂量的使用容易在田间和林间形成亚致死剂量。BtA对天敌昆虫造成威胁的同时,害虫也容易对杀虫剂形成很高的抗药性。本文将以一种重要的农业害虫棉铃虫作为模式昆虫,着眼于雄蛾和雌蛾的求偶和交配等生殖行为,研究亚致死剂量的BtA处理棉铃虫幼虫后,对其成虫的性信息素通讯系统会产生何种影响。我们希望通过该研究后对棉铃虫已有的了解,能够对其他一些关于治理鳞翅目类害虫过于依赖转基因作物的问题提供移动的参考和预警。同时也为生产上棉铃虫性信息素诱芯的改良,抗药性增长的潜在风险,同型交配进化预测,科学合理的用药剂量等提供参考。本文一共分为两大块内容:1.研究亚致死剂量的BtA处理棉铃虫三龄幼虫至其化蛹和羽化后对成虫的性信息素通讯系统有何影响;2.利用生物信息学工具和3D同源建模法,构建棉铃虫性信息素合成激活神经肽受体蛋白(HarmPBANr)的3D模型,并预测了潜在结合位点和部分保守位点。具体研究结果如下:1.亚致死复配生物农药BtA处理棉铃虫幼虫后对成虫性信息素通讯系统的影响(1)亚致死BtA处理棉铃虫三龄幼虫至其化蛹后,幼虫致死率、蛹的致畸率和蛹期随着BtA的浓度上升而增大。化蛹率、羽化率随着BtA的浓度上升而下降。有趣的是,雄蛾的平均蛹重随着BtA的升高而下降,但是雌蛾的平均蛹重在BtA的浓度为0.5μg/g到2.0μg/g时反而有所增加。BtA处理后,绝大多数蛹在刚化蛹时处于滞育状态。(2)亚致死BtA处理棉铃虫三龄幼虫后,存活雌蛾的求偶时节律与对照组差异不显著,但是求偶百分比显著小于对照组的雌蛾,求偶高峰期略有延迟。存活雌蛾性腺中两种性信息素主要成分Z-11-hexadecenal (Z11-16:Ald)和Z-9-hexadecenal(Z9-16:Ald)含量上升,变异系数变大,而且彼此之间的比例发生了变化。次级组分Z9-16:Ald所占比例有所上升。(3)亚致死BtA处理棉铃虫三龄幼虫后,存活的雄蛾对棉铃虫雌蛾性信息素Z9-16:Ald、Z11-16:Ald以及两者混配组分(Z11-16:Ald: Z9-16:Ald=97:3)的触角电位(EAG)反应值与对照组相比显著增加。在风洞试验中,存活的雄蛾对棉铃虫雌蛾诱芯(300ng, Z11-16:Ald: Z9-16:Ald=97:3)的行为反应在”定向”上要大于对照组,但是在”接近诱芯”和”降落”上要显著小于对照组的雄蛾。(4)在交配选择性试验中,无论BtA处理组的雄蛾还是对照组的雄蛾都倾向于和对照组的雌蛾进行交配,而且还有少量BtA处理组的雄蛾在暗期结束后仍然没有与任何雌蛾进行交配。2.棉铃虫性信息素合成激活神经肽受体蛋白生物信息学分析和3D同源建模利用蛋白质同源建模法,以牛视紫红质受体蛋白(PDB:1u19)的结构作为模板构建HarmPBANr的3D预测结构模型。已知构建的HarmPBANr预测模型7个跨膜区域与模板蛋白在结构上几乎保持一致,同源性较高,但是N-端部分以及胞外环和胞内环与模板蛋白相差较大。根据已知的G蛋白偶联受体和配体分子的结合活性,预测了HarmPBANr胞外部分对配体分子的结合位点,它们分别是:Thr24、 His26、Gln33、 Glu110、 Ile114、 Met177、 Gln178、 Ile181、 Ser183、 Tyr184、 Lys197、Leu296、 Tyr307、Ile308和Val309。