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目的:白细胞介素(Interleukin,IL)-35是调节性T细胞(Regulatory T cells,Treg)分泌的一种免疫抑制性细胞因子,可以抑制辅助性T细胞(T helper,Th)-17的增殖,而Th17细胞参与了多种自身免疫性疾病的发病机制。血管新生与骨侵蚀发生于类风湿关节炎(Rheumatoid Arthritis,RA)早期并贯穿于整个病程,而且骨中血管内皮生长因子(Vascular Endothelial Growth Factor,VEGF)不受控制的表达可导致破骨细胞(Osteoclast,OC)骨吸收增加从而加速骨破坏。近年来研究表明Th17细胞可通过产生IL-17直接刺激血管生成,或通过诱导RA巨噬细胞和成纤维细胞分泌血管生成因子间接刺激血管生成。本文旨在研究IL-35对OC活力、凋亡的影响及其对VEGF及其受体Fms-like tyrosine kinase(Flt-1)和Fetal liver kinase(Flk-1)表达的影响,并探讨其作用机制。方法:在本研究中,小鼠单核巨噬细胞白血病细胞株RAW264.7被用作OC前体,由NF-κB配体受体激活剂(Receptor Activator of Nuclear Factor Kappa-B ligand,RANKL)和巨噬细胞集落刺激因子(Macrophage Colony Stimulating Factor,M-CSF)诱导成为OC。将诱导成功的OC先用肿瘤坏死因子(Tumor Necrosis Factor,TNF)-α20 ng/ml刺激2小时,去除刺激后再与不同浓度的IL-35(0、25、50、100 ng/ml)培养48小时。分别通过Cell Counting Kit-8(CCK-8)法和流式细胞术(Flow cytometric method,FCM)测定对OC存活率和凋亡的影响,通过酶联免疫吸附法(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)测定OC上清液中VEGF蛋白的表达,实时定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-PCR)、蛋白免疫印迹(Western blot)分别检测VEGF,Flt-1和Flk-1的mRNA和蛋白的表达。白花丹素(Plumbagin)被用作Th17/IL-17相关通路抑制剂,将诱导成熟的OC接种于细胞培养六孔板,待细胞贴壁后加入Plumbagin 1uM培养24小时以阻断Th17/IL-17相关通路,去除阻断后加入TNF-α20 ng/ml刺激2小时,去除刺激后再与不同浓度的IL-35(0、25、50、100 ng/ml)培养48小时,如此获得细胞样本后再次进行RT-PCR、ELISA、Western Blot检测VEGF,Flt-1和Flk-1的mRNA和蛋白的表达。结果:1、100ng/ml IL-35组的OC活力相较于0ng/ml IL-35对照组降低,差异有统计学意义(P<0.01),说明IL-35可以抑制OC活力。2、实验组25ng/ml、50ng/ml、100ng/ml IL-35的细胞凋亡率相较于0ng/ml IL-35组增大(P<0.01),这说明IL-35可以剂量依赖性地促进OC的凋亡。3、IL-35处理后,实验组OC中VEGF,Flt-1的表达较对照组降低(P<0.05)。4、OC中未检测到Flk-1 mRNA及蛋白的表达。5、为了探索细胞机制,在用Plumbagin阻断后,实验组和对照组中VEGF和Flt-1的表达相比无异(P>0.05)。结论:1、在体外,IL-35可以剂量依赖性抑制OC活力,促进OC凋亡。2、在体外,IL-35可通过Th17/IL-17相关通路抑制OC表达VEGF及其受体。