表皮葡萄球菌耐药谱、毒力基因检测及分子流行病学研究

来源 :温州医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:xiazixu
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目的:  葡萄球菌由于其较强的致病性以及对常用抗菌药物较高的耐药率,一直被认为是引起医院和社区感染的重要病原菌。表皮葡萄球菌(StaphylococcusEpidermidis,SE)作为葡萄球菌家族中的一员,近些年逐渐成为医疗相关感染(healthcare-associated infection,HAI)的重要病原菌之一,特别是引起生物植入物相关的感染,在植入物表面易形成生物膜,使其致病性和耐药性增强。本研究旨在于了解温州地区分离的表皮葡萄球菌对常用的抗菌药物的耐药谱、携带的毒力基因及分子流行病学特征。  方法:  收集温州医科大学附属第一医院2002年-2008年及2012年-2014年从临床各种标本中分离的表皮葡萄球菌,同一个患者的相同部位分离的菌株选取首次分离株,共1018株。用革兰染色、触酶试验、凝固酶试验和VITEK全自动微生物分析仪对细菌进行菌种鉴定。同时收集无泌尿系统疾病的不育症患者尿道口表皮葡萄球菌正常定植株,菌种的鉴定采用PCR技术扩增细菌的16SrRNA,将PCR扩增产物进行DNA测序,测序结果通过NCBI网站的Blastn程序在线比对,鉴定细菌为表皮葡萄球菌,共106株。采用PCR技术扩增mecA、icaA、aap和sesⅠ基因进行耐甲氧西林表皮葡萄球菌(methicillin-resistant StaphylococcusEpidermidis,MRSE)的筛选和毒力基因的检测;采用K-B纸片法及E-test法对表皮葡萄球菌进行10种常用抗菌药物的药物敏感性试验;应用多位点序列分型(Multi Locus Sequence Typing,MLST)技术和eBURST软件对表皮葡萄球菌进行序列分型和亲缘性分析。  结果:  1018株临床分离株中,848株为mecA阳性,判断为MRSE,阳性率为83.30%;106株定植株中,63株为mecA阳性,判断为MRSE,阳性率为59.43%。临床分离株MRSE检出率高于正常定植株。1018株临床分离株icaA、aap和sesⅠ毒力基因的阳性率分别为28.49%、68.47%和16.70%,而定植株icaA、aap和sesⅠ基因的阳性率分别为22.64%、57.55%和3.77%。临床分离株aap和sesⅠ毒力基因的阳性率明显高于正常定植株,具有统计学意义。对随机挑选的457株临床分离株和106株正常定植株进行药物敏感性试验,发现所有细菌对万古霉素敏感,临床分离株对青霉素、四环素、环丙沙星、氯霉素、庆大霉素、克林霉素、红霉素、复方新诺明以及利奈唑胺的耐药率较正常定植株高。逐年分析临床分离株对抗菌药物耐药率的变化发现,临床分离株对青霉素、四环素、环丙沙星、氯霉素、庆大霉素以及复方新诺明的耐药率总体呈下降趋势,对克林霉素和红霉素的耐药率呈上升趋势。457株临床分离株中总共发现76个ST型,主要为ST2(62/457,13.57%),其次为ST466(53/457,11.60%)、ST59(28/457,6.13%)、ST130(26/457,5.69%)、ST20(25/457,5.47%)、ST210(19/457,4.16%)、ST125(14/457,3.06%)、ST14(12/457,2.63%)和ST235(11/457,2.41%);106株定植株中发现了32个ST型,主要为ST130(19/106,17.92%)、ST466(16/106,15.09%)和ST20(14/106,13.21%)。临床分离株与定植株的主要ST型不同。比较主要ST型菌株的耐药谱,发现ST2型菌株的耐药谱较ST466型、ST130型、ST20型和ST59型菌株的耐药谱广,ST2型菌株对青霉素、环丙沙星、庆大霉素、克林霉素、红霉素以及复方新诺明的耐药率均较高,其他主要ST型菌株仅对2-3个抗菌药物的耐药率较高。比较主要ST型菌株icaA、aap和sesⅠ毒力基因携带率,发现不同ST型菌株携带的毒力基因谱明显不同,ST2型菌株三种毒力基因携带率均超过90%;而ST130型菌株3种毒力基因的携带率均较低;ST20型菌株icaA和aap携带率超过90%,而sesⅠ携带率只有2.56%; ST466和ST59型菌株aap携带率超过90%,其他2种毒力基因的携带率较低。对本研究表皮葡萄球菌的ST型进行eBURST分析,75.49%(345/457)的临床分离株和72.64%(77/106)的定植株属于CC2,临床分离株中还发现了7个次要的CC,包括CC365、CC193、CC227、CC171、CC33、CC326以及CC66,占7.88%(36/457),正常定植株中还发现了CC365、CC193、CC227和CC66。发现临床分离株的起源(Founder)是ST5,表皮葡萄球菌全球数据库中的Founder为ST2,而ST5是属于CC2;定植株的Founder是ST85,同样属于CC2。临床分离株与定植株的Founder均属于CC2。  结论:  1.表皮葡萄球菌临床分离株耐药率和毒力基因携带率比正常定植株更高。  2.表皮葡萄球菌临床分离株与正常定植株ST型不同,但大部分同属于CC2群。  3.不同ST型菌株耐药谱和毒力基因谱特征不同,高耐药率和携带更多的毒力基因可能是ST2型菌株成为临床分离株主要克隆的原因。
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