酸性物质对哈密瓜细菌性果斑病菌生物膜形成的影响及抑菌作用

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瓜类细菌性果斑病(Bacterial fruit blotch,BFB)由西瓜嗜酸菌(Acidovorax citrulli,Ac)引起,是西瓜、甜瓜生产上的一种毁灭性病害,也是国际性的检疫性病害,给西瓜和甜瓜产业造成重大损失。对于BFB的防治,目前尚无有效措施。病原细菌形成的生物膜在引起植物发病过程中起到了重要作用,抑制或降低西瓜嗜酸菌生物膜的形成将成为防控BFB的一种新策略。目的:确定酸性物质对西瓜嗜酸菌生物膜形成的影响;初步揭示酸性物质对西瓜嗜酸菌菌体及其生物膜的作用机制;并探索西瓜嗜酸菌生物膜形成与其致病力之间的关系,为抑制西瓜嗜酸菌生物膜形成及防治BFB提供理论依据。方法:通过微孔板法,利用结晶紫染色筛选出西瓜嗜酸菌生物膜形成的最佳条件,并检测了酸性环境下西瓜嗜酸菌生物膜形成能力;通过牛津杯法、显微观察、鞭毛染色、荧光定量检测等方法测定酸性物质对西瓜嗜酸菌生长、菌体结构以及生物膜形成与致病力相关基因表达的影响,探究酸性物质对西瓜嗜酸菌的抑菌机制;通过测定酸性环境下西瓜嗜酸菌纤维素酶和果胶酶活力变化以及西瓜嗜酸菌在哈密瓜叶片上生物膜形成和致病力,探究酸性物质对叶片上西瓜嗜酸菌生物膜形成和致病力的影响。结果:在初始菌悬液浓度为1×10~7cfu/m L,接种量为1:10(菌悬液:培养液)且LB培养液中含有10μg/m L的Mg SO4,28℃培养24 h的条件下适合西瓜嗜酸菌生物膜的形成,但酸性环境下西瓜嗜酸菌生物膜形成受到抑制。相同p H值的有机酸比无机酸对西瓜嗜酸菌生长的抑制作用明显,随着p H值的降低,有机酸抑菌作用显著,p H值为2的乙酸处理后抑菌圈直径达32.67 mm;经乙酸处理后的西瓜嗜酸菌鞭毛脱落;菌体出现孔洞和皱缩变形,p H值为2的处理组未观察到完整菌体形态。乙酸破坏了西瓜嗜酸菌细胞膜的稳定性,导致细胞内核酸等物质的外泄增多,部分菌体死亡;同时引起西瓜嗜酸菌细胞内活性氧含量的改变以及部分生物膜形成相关基因和致病相关基因表达量的显著下调。酸性环境下西瓜嗜酸菌产生的纤维素酶和果胶酶活力均有所下降,此外,西瓜嗜酸菌能在哈密瓜叶片上形成生物膜,接种7天后发现接种浓度约为1×10~8cfu/m L的西瓜嗜酸菌在哈密瓜叶片上形成了较多的生物膜,发病叶片被染色面积大且颜色深,叶片发病严重。p H值为4的乙酸可抑制哈密瓜叶片上西瓜嗜酸菌生物膜的形成,并降低哈密瓜叶片发病的病情指数。结论:酸性物质能够抑制西瓜嗜酸菌的生长,对其菌体结构等生物学特性产生影响,同时也能抑制西瓜嗜酸菌生物膜的形成,利用乙酸溶液处理西瓜嗜酸菌生物膜可有效降低哈密瓜苗期的发病率。本研究表明乙酸对西瓜嗜酸菌生物膜的形成及致病力有一定的抑制作用,以期利用乙酸安全有效地防治BFB。
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