论文部分内容阅读
[目的]体外分离培养人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblasts, hPDLFs)。探讨体外不同应力刺激对hPDLFs与正畸牙周组织改建相关的细胞因子基质金属蛋白酶-1(matrix metalloproteinase-1, MMP-1)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)表达的影响。进一步研究正畸牙移动过程中牙周组织改建的机械生物力学机制。[方法]采用改良组织块贴附法体外培养hPDLFs并进行细胞传代,通过细胞形态学及免疫组织化学方法对其进行鉴定,为后续应力实验提供细胞。运用Forcel四点弯曲细胞力学加载仪对hPDLFs分别施加动态张、压应力(强度5000μstrain,频率0.5Hz)。按总的加力时间分为0、2、6、12h 4个组。利用免疫荧光技术、激光共聚焦显微镜以及流式细胞仪检测hPDLFs内基质金属蛋白酶-1(MMP-1)碱性磷酸酶(ALP)以及血管内皮生长因子(VEGF)的表达变化；利用Western blot方法检测动态张、压应力对hPDLFs MMP-1蛋白表达的影响。[结果]采用改良组织块贴附法成功培养出原代牙周膜细胞,并证实所培养的细胞是中胚层来源的hPDLFs。正常hPDLFs均表达MMP-1、ALP及VEGF。动态压应力可导致hPDLFs MMP-1的表达在加力6h组升高,ALP的表达在加力2h组降低。动态张应力可导致hPDLFs MMP-1的表达在加力2h组升高,ALP的表达在加力6h组降低。动态张、压应力均可下调hPDLFs VEGF的表达；动态张应力作用12h后hPDLFs VEGF的表达回升至对照组水平。[结论]本实验采用改良组织块贴附法成功培养hPDLFs。MMP-1、ALP及VEGF参与hPDLFs机械应力信号传导过程,上述细胞因子表达变化与体外应力性质及加力时间存在相关性。MMP-1及ALP可能作为相关因子参与正畸牙移动牙周组织改建过程。hPDLFs对动态张应力可能适应较快并恢复VEGF的表达而加快牙周组织的改建。