论文部分内容阅读
仔猪在断奶等因素影响下产生免疫应激,引发肠道炎症发生,从而导致出现腹泻等一系列健康问题,植物源生物活性物质可通过调节免疫信号通路来改善畜禽肠道健康。没食子酸（Gallic acid,GA）作为一种植物源生物活性物质的多酚类化合物具有抑菌、抗氧化和抗炎等多种生物功能。目前对没食子酸调控断奶仔猪肠道免疫功能的作用及其具体机制知之甚少。本研究拟通过体内动物试验、体外细胞培养试验相结合来探究没食子酸对仔猪肠道黏膜炎症反应的调控作用及其分子机制。本研究主要包括以下4个部分:（1）研究日粮中不同水平没食子酸添加量对断奶仔猪生长性能及腹泻率的影响。挑选96头初始体重相近的杜?长?大三元杂交断奶仔猪,随机分为4个处理:对照组（基础日粮）、GA 100组（基础日粮+100 mg/kg GA）、GA 200组（基础日粮+200mg/kg GA）、GA 400组（基础日粮+400 mg/kg GA）。每个处理设6个重复（栏）,每个栏放置4头仔猪。试验周期为21天。（2）研究日粮中不同水平没食子酸添加量对攻毒断奶仔猪抗氧化和免疫功能的影响。在动物试验第21天,每栏各选取1头体重中等的仔猪,腹腔注射脂多糖（LPS）刺激4小时以诱导肠道炎症反应。（3）研究外源添加没食子酸对损伤IPEC-J2细胞的保护作用。体外培养猪小肠上皮细胞IPEC-J2,使用H2O2或LPS刺激细胞建立应激模型,测定相关氧化和免疫指标。（4）研究没食子酸对IPEC-J2细胞免疫功能的影响。使用NF-κB通路特异性抑制剂bay11-7082,抑制NF-κB信号通路,明确没食子酸调控IPEC-J2细胞免疫功能和屏障功能的关键靶点。试验结果表明:日粮添加没食子酸对仔猪的生长性能以及LPS攻毒前/后的抗氧化状态无显著影响（P>0.05）;但日粮添加400 mg/kg的没食子酸能显著降低仔猪腹泻率（P<0.05）。添加不同剂量的GA可通过提高绒毛高度、降低隐窝深度以及提高两者的比值（P<0.05）,来改善仔猪肠道的形态,其中对空肠的作用优于对回肠的作用。此外,GA还能通过增加肠黏膜sIgA的分泌以及降低各类促炎性细胞因子的表达（P<0.05）,来调节攻毒断奶仔猪的免疫功能。体外细胞试验表明,外源添加GA可通过抑制NF-κB-IκBα-IκKα/β通路活化,显著降低IPEC-J2细胞中LPS诱导的IL-8、TNF-α等促炎性因子的表达以及炎症酶COX-2的水平（P<0.05）,并且GA有提高细胞内过氧化氢酶活性和上调mRNA水平的趋势。此外,GA还能通过上调紧密连接蛋白ZO-1、Occludin的表达来提高细胞的屏障功能。本研究结果表明日粮添加没食子酸可通过调节断奶仔猪的肠道免疫功能来降低仔猪的腹泻率,阐明没食子酸通过抑制NF-κB信号通路调控肠道炎症反应的分子机制,这对没食子酸在断奶仔猪上的应用提供了研究基础。