金雀异黄酮对体外培养的子宫内膜异位细胞的作用及其机制

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目的:探讨金雀异黄酮(Genistein,GEN)对体外培养的小鼠子宫内膜异位细胞的抑制作用及其凋亡相关的机制。  方法:选取30只6~7周龄,体重20g的雌性Balb/c小鼠,制备小鼠子宫内膜异位症动物模型,分别从正常小鼠的子宫,异位症小鼠子宫及异位症小鼠的种植物中切取组织块,降解,温育并最终过滤获得内膜细胞,在DMEM培养基中进行原代培养,在电镜下观察其形态及生长模式。不同剂量(0.1μM,1μM,10μ M)的金雀异黄酮处理正常子宫内膜细胞,异位症在位细胞(EMs Eutopic cells)和异位症异位细胞(EMs Ectopic cells)24小时后,用MTT法测定观察GEN对内膜细胞的抑制作用;采用ANNEXINⅤ/PI染色法观察了各组内膜细胞的凋亡率;利用PCR技术检测高剂量(10μ M)金雀异黄酮处理前、后异位内膜胞中Caspase-8和 NF-κ B的表达。  结果:1)体外成功培养了正常子宫内膜、EMs在位内膜及EMs异位内膜细胞,电镜下观察异位症内膜间质细胞较在位间及正常内膜间质细胞偏小,表面不规则,有较多微绒毛。  2)正常子宫和EMs在位内膜细胞生长速度较EMs异位细胞慢,AnnexinⅤ/PI染色,显示三种细胞凋亡率分别为34.5%,32.1%及20.6%,呈逐步下降趋势。  3)不同浓度GEN处理EMs异位内膜细胞24小时细胞生长率分别为99.74±3.21%,94.00±2.51和71.58±4.42%,高剂量GEN抑制EMs异位内膜细胞的生长(P<0.05)。  4)高剂量GEN处理前、后异位内膜胞的凋亡及死亡细胞数量增加,NF-kB mRNA的表达量呈降低趋势,Caspase-8 mRNA的表达量增加。  结论:1)高浓度金雀异黄酮能够抑制体外培养的子宫内膜异位症异位细胞的增殖,促进细胞凋亡。2)金雀异黄酮可能是通过下调NF-κ B表达和上调Caspase8的表达发挥对异位内膜细胞的抑制作用。
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