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目的:最近研究显示癌症来源于癌干细胞(CSC) ,即肿瘤源发细胞,其有许多特性与干细胞相似。已分离鉴定出人的癌症细胞中存在CSC,而动物源性CSC的分离鉴定仍未见报道。根据人源性肿瘤细胞与动物源性肿瘤细胞有诸多相似的生物学特性,本研究试图从鼠黑色素瘤B16F10细胞中分离与鉴定CSC,为今后对CSC抗药性、靶向治疗及信号传导通路等研究奠定基础。方法:从小鼠黑色素瘤分离瘤细胞,用不同免疫磁珠标记的单克隆抗体筛选出具有特征性标记的瘤细胞,采用流式细胞仪,对分离细胞进行鉴定和纯度评价;体外观察不同CD表型瘤细胞的增殖活性;再经软琼脂培养基或普通培养基形成克隆能力筛选及通过皮下注射特征性CD标记的瘤细胞到C57BL/6小鼠体内,比较其致瘤性,最后综合分析与鉴定B16F10细胞中CSC。结果:1.用不同免疫磁珠标记的单克隆抗体从小鼠B16F10细胞中成功分离出CD133~+、CD133~―、CD44~+、CD44~―、CD44~+CD133~+、CD44~+CD133~―等特征性CD标记的瘤细胞,经流式细胞仪分析显示,用不同免疫磁珠标记的单克隆抗体分离的瘤细胞纯度较高、两者检测结果基本一致。2.经软琼脂培养基或普通培养基形成克隆能力筛选结果显示:CD133~+ B16F10细胞的克隆形成率高于CD133~―B16F10细胞,CD44~+ B16F10细胞克隆形成率高于CD44~―B16F10细胞。CD44~+CD133~+ B16F10细胞克隆形成率高于CD44~+CD133~―B16F10细胞。3. CD133~+ B16F10细胞体外增殖活性要高于CD133―。4. CD133~+、CD44~+、CD44~+CD133~+和CD44~+CD133~+CD24+ B16F10细胞在C57BL/6小鼠体内致瘤性分别强于CD133~―、CD44~―、CD44~+CD133―和CD44~+CD133~+CD24―B16F10细胞。结论:CD133~+ B16F10细胞体外增殖活性较高, CD133~+、CD44~+、CD44~+CD133~+ B16F10细胞在软琼脂培养基或普通培养基上形成克隆能力较强、CD44~+CD133~+ CD24+ B16F10