论文部分内容阅读
水稻株高是水稻重要的农艺性状之一,分离克隆株高相关基因并从分子水平阐明水稻株高的作用机理,对于指导水稻育种具有重要的理论和实践意义。本实验室分离了1个水稻长颈穗基因Euil的内含子T-DNA插入显性矮化突变体。在此基础上,本研究对Euil内含子的表达调控作用进行研究,主要研究内容和结果如下: (1)构建了由自身启动子控制的Euil cDNA(即没有内含子)的转化载体,转化野生型粳稻中花11,获得矮化的T0代植株。对转基因后代T1代进行了遗传分析,表明含转基因植株与矮化表型共分离。 (2)对转基因后代T1代分离的高株和矮株的Euil基因进行了不同时期根茎叶各组织表达分析,结果表明Euil基因在T1代分离出的矮株根茎叶的表达量均上调,尤其是茎叶组织中上调表达最高。 (3)制备了Euil的多克隆抗体,western blot结果表明,与野生型相比,T1矮化株中的由Euil基因编码的细胞色素P450蛋白表达量明显提高。 (4)对T-DNA插入矮化突变体进行了染色质免疫共沉淀分析,结果表明突变体中的Euil基因启动子、内含子和终止子三个部位的乙酰化程度均比野生型的要高。 (5)为了探究T-DNA插入位置的Euil内含子序列是否是某些调控因子的靶标,从该内含子位点分离了一段247 bp序列构建酵母单杂交诱饵载体。利用酵母单杂交技术筛选中花11茎的cDNA文库,筛出了11个阳性候选克隆。其中对68号候选克隆myb17及myb17的同源基因myb305进行了酵母单杂交验证,表明它们与这段DNA序列只有弱互作。 (6)构建Myb17干涉载体、超表达载体,转化中花11,但获得的转化体没有产生矮化表型。 本研究结表明,Euil的内含子具有负调控该基因mRNA水平的功能,这种功能可能涉及控制组蛋白的去乙酰化反应。