目的:本研究选取依托泊苷作为难溶性的模型药物,制备一种新型靶向纳米药物递送系统-叶酸修饰的依托泊苷立方液晶纳米粒;并以普通依托泊苷为对照药,研究叶酸修饰的依托泊苷立方液晶纳米粒在体内外的靶向效果;由此评价靶向立方液晶技术应用于提高肿瘤化疗疗效的优势及可行性。方法:采用注入法制备叶酸靶向依托泊苷立方液晶,以单因素试验设计进行处方工艺的筛选;以纳米粒的外观、粒径、电位等作为主要评价指标,进行叶酸靶向依托泊苷立方液晶的处方工艺研究,以确定最优处方组成及最佳工艺条件;采用HPLC法进行依托泊苷含量测定;制备的靶向基团泊洛沙姆407-叶酸利用核磁共振氢谱仪和差示扫描量热仪进行分析;通过粒度分析仪、偏光显微镜和差示扫描量热仪对叶酸靶向依托泊苷立方液晶进行物理表征,观察测定叶酸靶向依托泊苷立方液晶的粒径、形貌等微观特征;建立了叶酸靶向依托泊苷含量测定方法,通过依托泊苷原料药与叶酸靶向依托泊苷立方液晶的体外释放特性的对比研究,评价叶酸靶向依托泊苷立方液晶在改善释放速率方面的纳米效应;通过细胞毒性实验和细胞摄取试验初步评价叶酸靶向依托泊苷立方液晶对癌细胞的杀伤作用;最后构建了裸鼠模型,以罗丹明B为荧光染料包载进入立方液晶体系,采用活体成像技术对叶酸修饰的立方液晶的肿瘤靶向性进行评价。结果:通过单因素试验确定了叶酸靶向依托泊苷立方液晶的初始处方由甘油单油酸酯、泊洛沙姆407、叶酸组成。最佳的工艺是通过真空抽滤法除去有机溶剂;所制备的叶酸靶向依托泊苷立方液晶粒径较小、电位稳定、分布均匀,平均粒径为180.9±1.4nm,PDI为0.167±0.007,Zeta电位值为-26.7±0.3mV;依托泊苷的包封率大约为84.7%±2.30%;立方液晶具有光学同向性,偏光显微图显示为暗视野表明属于立方液晶形态;DSC测定结果显示叶酸靶向依托泊苷立方液晶的相变温度消失;叶酸靶向依托泊苷立方液晶能有效提高药物溶解度及体外释放速率。采用MTT法研究并比较依托泊苷溶液、依托泊苷立方液晶纳米粒、叶酸靶向依托泊苷立方液晶纳米粒对MCF-7肿瘤细胞体外生长及增值的影响,评价体外抗肿瘤活性。结果表明,依托泊苷的抗肿瘤活性依次为:叶酸修饰的依托泊苷立方液晶纳米粒>依托泊苷立方液晶纳米粒>依托泊苷溶液,半数抑制浓度分别为:3.60±0.68、6.73±1.69和47.89±12.60μg/ml。由细胞摄取实验可知,两种立方液晶在细胞中的蓄积度均高于游离罗丹明B溶液组,叶酸实验组高于非叶酸组和罗丹明B溶液组。荧光成像结果显示立方液晶包载的罗丹明B在裸鼠体内潴留时间短,主要蓄积在肝脏等部位,肿瘤部位荧光较低,而叶酸靶向立方液晶包载的罗丹明B在荷瘤裸鼠体内肝脏蓄积较少,主要通过膀胱排泄,尤其在肿瘤部位有较多蓄积,且能够较长时间维持较高的浓度。结论:本实验将泊洛沙姆407和叶酸以80/20(wt%)质量比作为稳定剂制备立方液晶纳米粒。通过偏光显微镜和差示扫描量热仪对立方液晶进行表征。同依托泊苷溶液相比,依托泊苷立方液晶纳米粒和叶酸靶向依托泊苷立方液晶纳米粒具有体外缓释效应。另外,与立方液晶包载的罗丹明B相比,叶酸靶向立方液晶包载的罗丹明B在人乳腺癌MCF-7细胞中具有更强的细胞摄取能力,叶酸靶向依托泊苷立方液晶的细胞毒性作用比依托泊苷立方液晶和依托泊苷溶液更强。以上结果表明叶酸靶向依托泊苷立方液晶可作为新型靶向药物递送载体。综上所述,基于纳米给药技术构建的叶酸靶向依托泊苷立方液晶递送系统对肿瘤具有良好的靶向性,能够大量蓄积于肿瘤部位,具有显著的抗肿瘤效果。总而言之,叶酸靶向依托泊苷立方液晶具有成为应用于肿瘤临床治疗新剂型的重大潜能,具有临床研究意义。