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禽心包积液-肝炎综合征(Hydropericardium-Hepatitis Syndrome,简称为HHS),主要由Ⅰ群血清4型禽腺病毒(Fowl Adenovirus serotype 4,FADV-4)感染所引起,以心包积液、肝组织损伤等为主要特征。该病1987年首次在巴基斯坦安卡拉地区爆发,因此又称之为禽“安卡拉病”。目前该病在世界多个国家均有流行,造成严重影响。2015年,该病在中国许多地区流行,造成雏鸡免疫功能降低,死淘率升高,给中国养禽业带来严重的经济损失。目前为止,对于安卡拉病我国还未有商品化疫苗在临床上使用,因此急需研发有效疫苗来预防此病。五邻体(Penton)蛋白是FADV的主要结构蛋白,具有良好的抗原性和免疫原性,而且高度保守。本试验以Penton基因为研究对象,构建pcDNA3.1-Penton重组质粒,将重组质粒以不同剂量免疫雏鸡,探究其免疫原性,为研制有效安卡拉病疫苗提供相应的理论依据。试验内容及结果如下:1.根据GenBank上FAdV-4 Penton基因序列设计引物,以本实验室保存的FAdV-4阳性病料肝组织DNA为模板,进行Penton基因扩增、纯化,然后将纯化的Penton基因与pMD19-T克隆载体连接,构建pMD19-T-Penton重组质粒,进行HindⅢ和EcoRⅠ双酶切鉴定,然后将Penton基因与pcDNA3.1载体连接,最终成功构建pcDNA3.1-Penton重组质粒。2.本试验共选取90只3日龄健康雏鸡,30只为SPF雏鸡,60只为商品化海兰褐雏鸡,共分6组,每组15只。分组为:SPF雏鸡免疫组和对照组;商品化雏鸡低、高剂量及低剂量佐剂免疫组和对照组,免疫方式为肌肉注射,初次免疫7d后加强免疫一次。初次免疫后每周进行采血,通过ELISA方法检测免疫后血清中FAdV-4抗体水平、白细胞介素6(IL-6)和干扰素γ(IFN-γ)含量,进而评价免疫效果。试验结果显示,pcDNA3.1-Penton重组质粒免疫雏鸡后,免疫组均产生FAdV-4抗体,其中SPF雏鸡免疫组与商品化雏鸡低剂量组比较,血清中FAdV-4抗体差异不显著(P>0.05),与空白对照组比较差异极显著(P<0.01);商品化雏鸡低剂量与高剂量组比较,高剂量与低剂量佐剂组比较,差异不显著(P>0.05);高剂量、低剂量佐剂组与低剂量免疫组比较,差异显著(P<0.05),免疫组与空白对照组比较,差异极显著(P<0.01)。血清中IFN-γ和IL-6的含量:在7、14和21 d,SPF雏鸡免疫组与商品化雏鸡低剂量组之间差异不显著(P>0.05),与空白对照组差异极显著(P<0.01);商品化雏鸡低、高剂量及低剂量佐剂组与对照组比较,差异极显著(P<0.01);低剂量佐剂组与低、高剂量组之间差异显著(P<0.05),低剂量、高剂量组之间比较差异不显著(P>0.05),21 d后,所有免疫组与空白对照组之间差异不显著(P>0.05)。本试验结果表明,构建的pcDNA3.1-Penton重组质粒免疫雏鸡后,机体均能产生FAdV-4特异性抗体,说明构建的pcDNA3.1-Penton重组质粒具有很好的免疫原性,并且弗氏佐剂免疫组与高剂量免疫组产生的FAdV-4特异性抗体均高于低剂量组;与空白对照组比较,各免疫组血清中IFN-γ和IL-6含量均升高,说明pcDNA3.1-Penton重组质粒免疫后,能诱导细胞免疫和体液免疫等相关细胞因子的产生。