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目的:研究白花蛇舌草活性部位联合紫杉醇逆转肿瘤细胞多药耐药的效果,并探究其机制。方法:(1)白花蛇舌草活性部位的的筛选:采用95%乙醇加热回流提取白花蛇舌草,经石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯萃取得到不同的有效部位:石油醚部位HDW-A、二氯甲烷Ⅰ部位HDW-B、乙酸乙酯Ⅰ部位HDW-C、二氯甲烷Ⅱ部位HDW-D、乙酸乙酯Ⅱ部位HDW-E、乙酸乙酯Ⅱ精制部位HDW-F,通过MTT法测定不同萃取物对人肺癌A549细胞和人肺癌耐紫杉醇A549/T细胞生长的抑制效果,筛选最佳活性部位;(2)LC-MS定性分析白花蛇舌草活性部位:通过液质联用技术对HDW-E、HDW-F中的化学成分进行定性分析;(3)两药联合比例的考察:将HDW-E、HDW-F分别与紫杉醇PTX联合给药,采用MTT法测定细胞活力,以联合指数(CI)作为指标,优选最佳联合比例;(4)两药联合逆转多药耐药的效果及机制研究:检测细胞凋亡、细胞周期、细胞增殖以及AKT-mTOR-p70信号通路蛋白的表达,利用激光共聚焦显微镜观测紫杉醇在A549/T细胞中的累积以及给药后细胞纺锤体的形态变化;(5)体内抗肿瘤活性的评价:采用A549/T细胞的裸鼠肿瘤模型,分别设置紫杉醇组(10mg/kg)、HDW-F组(0.1g/kg)、两药联合组(10mg/kg+0.1g/kg),考察两药联合对抑瘤率的影响。结果:(1)白花蛇舌草活性部位的的筛选:经MTT实验优选出的白花蛇舌草的最佳活性部位为HDW-E。纯化HDW-E,获得蒽醌类组分HDW-F,纯化后的HDW-F对A549细胞和A549/T细胞的生长都具有一定抑制作用;(2)LC-MS定性分析白花蛇舌草活性部位:经LC-MS分析,HDW-E中的化学成分主要为环烯醚萜类、蒽醌类、黄酮类,而HDW-F中以蒽醌类化合物为主;(3)两药联合比例的考察:HDW-E浓度为17.5μg/mL,HDW-F浓度为21.5 μg/mL分别与1.58μM PTX联合给药,此时达协同最佳比例,其联合指数CI值分别为0.787和0.756;(4)两药联合逆转多药耐药的效果及机制研究:HDW-E和HDW-F分别与紫杉醇联合相较于空白对照组和单独给药组,均能显著抑制细胞增殖、诱导其凋亡、将细胞阻滞在G2/M期、下调磷酸化的AKT-mTOR-p70信号通路蛋白;经激光共聚焦显微镜观察,发现HDW-E、HDW-F能部分逆转紫杉醇在耐药细胞中累积量过低的现象,相比于空白对照组和两个单独给药组,能诱导细胞核出现多核现象;(5)在体内动物实验中,紫杉醇与HDW-F联合给药能显著抑制肿瘤的生长。结论:白花蛇舌草活性部位HDW-E、HDW-F分别与紫杉醇联合均具有协同增效的作用,均可抑制细胞增殖、阻滞细胞周期、诱导细胞凋亡并下调AKT-mTOR-p70信号通路蛋白表达、抑制肿瘤的生长;对耐药机制研究结果表明,HDW-E、HDW-F可通过增加紫杉醇在A549/T细胞中的积累实现逆转紫杉醇耐药,然而,HDW-E、HDW-F逆转紫杉醇耐药的作用靶点还有待进一步深入研究。经LC-MS分析,将HDW-E纯化得到的HDW-F的主要有效成分是蒽醌类,且HDW-F也具有良好的逆转紫杉醇耐药的作用,说明白花蛇舌草蒽醌类成分可逆转紫杉醇耐药。而HDW-E抑制细胞生长的效果优于HDW-F,推测HDW-E中含有的环烯醚萜类和黄酮类成分也具有一定的抗肿瘤活性,具体的作用机制还有待后续进一步的研究。本研究为白花蛇舌草抗肿瘤作用以及其逆转多药耐药的研究提供依据,为临床用药提供参考。