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尽管目前在脑梗死发生后神经细胞的凋亡机制及药物保护作用的研究取得了很大的突破和进展,为揭示脑梗死的本质和未来的临床治疗带来了希望,但是必须认识到,动物实验和临床应用还有很大的差距。最近越来越多的研究集中在脑梗死后患者外周血miRNAs的表达变化及其内源性神经保护作用,这使得miRNAs的基础研究更接近脑梗死的临床应用和实践了。MiRNAs在脑梗死的作用及其机制已成为一个研究热点。本研究的目的是检测miRNA在脑梗死患者外周血的差异表达,并探讨miRNA在脑梗死发生发展过程扮演的角色及其调控机制。第一部分脑梗死患者外周血miRNAs差异表达的分析目的：探讨脑梗死患者外周血miRNAs的异常表达及其作为诊断脑梗死的一种潜在的生物学标志物的可能性。方法：采用miRNAs微阵列芯片技术研究脑梗死患者和健康对照者外周血miRNAs表达谱的差异,再通过逆转录实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)方法验证候选miRNAs的表达量。结果：与健康对照组相比,miR-145在脑梗死患者外周血的表达差异没有统计学意义(P>0.05), miR-146a和miR-185在急性脑梗死患者的表达明显下调,差异有统计学意义(P<0.05)；此外,我们还发现miR-146a在亚急性脑梗死患者的表达却明显上调,差异有统计学意义(P<0.05)。结论：MiR-146a在脑梗死患者急性期与亚急性期外周血出现明显的表达不同,因此可作为急性脑梗死诊断的潜在生物标志物。第二部分MiR-146a靶向调控FBXL10及其抗凋亡分子机制的研究目的：目前有研究表明miR-146a在某些病理生理过程中是很强的促凋亡因子。同时我们通过生物信息学预测到miR-146a的两个可能潜在靶点-FBXL10和BCL2L2均为抗凋亡因子,因此我们推测在在缺血性脑损伤异常表达的miR-146a可能通过靶向调控FBXL10和/或BCL2L2参与脑梗死的发生发展。方法：利用生物信息学预测miR-146a的潜在靶基因,并通过双荧光素酶报告基因系统、qRT-PCR和Western blot等方法进行验证。我们采用体外氧糖剥夺再灌注损伤(OGD/R)的细胞模型来模拟脑缺血／再灌注损伤(I瓜)。把miR-146a mimic或inhibitor转染入人SK-N-SH细胞,以使miR-146a过表达或低表达。同时通过qRT-PCR检测FBXL10 mRNA和BCL2L2 mRNA的表达情况,采用Western blot检测FBXL10和BCL2L2蛋白的表达水平。并采用流式细胞仪检测细胞活力、损伤和凋亡情况。最后分析miR-146a及其靶点的相互作用并评价miR-146a模拟物和抑制剂对SK-N-SH神经元细胞凋亡的影响。结果：荧光素酶报告基因系统检测证实了]miR-146a的靶基因是FBXL10而非BCL2L2。与OGD/R组和miR-146a mimic组相比,转染miR-146a inhibitor使miR-146a低表达可以减轻OGD/R诱导的SK-N-SH细胞损伤,降低细胞凋亡率,而转染miR-146a mimic使miR-146a过表达后,明显加重OGD/R诱导的神经元细胞凋亡。同时我们用Western blot法检测了FBXL10的蛋白水平,发现与OGD/R组和miR-146a mimic组相比,转染miR-146a inhibitor明显增加了FBXL10的蛋白水平(P<0.05),而转染miR-146a mimic后FBXL10的表达水平明显下调(P<0.05)。然而,转染miR-146a mimic或miR-146a inhibitor对BCL2L2 mRNA及蛋白的表达均无明显影响(P>0.05)。结论：以上结果提示：在SK-N-SH神经元细胞氧糖剥夺再灌注损伤中,抑制miR-146a的表达可能通过上调FBXL10的表达水平从而发挥抗神经元细胞凋亡的作用。