替奈普酶作为纤溶酶原的激活剂,可通过催化人体内的纤溶酶原转变成纤溶酶,从而溶解血栓,临床上是治疗心肌梗死的药物。该药物目前国内批准使用的活性检测方法是气泡法,该方法主要存在检测结果波动较大、准确度与精密度不足等问题。现建立底物显色法,以得到更稳定可靠的替奈普酶活性检测方法。纤溶酶发色底物(S-2251)是一种显色底物,替奈普酶与其结合发生反应,反应过程产生的释放可在405 nm波长下被检测。根据该原理,建立了底物显色法检测替奈普酶相对结合活性的方法,并摸索得到理想的实验条件。其中,稀释液选择Tris-HCl、氯化钠、人血白蛋白的混合溶液,样品起始浓度为55000 IU/ml,样品稀释倍数为2倍,检测时间为30分钟。同时,也对该反应是否适合用于检测替奈普酶相对结合活性进行了方法学验证。验证结果显示,底物显色法对含替奈普酶的样品发生显色反应,对不含替奈普酶的样品不发生显色反应,专属性符合规定;同一人六次独立重复实验检测结果的RSD小于10%,两人各三次共六次独立重复实验检测结果的RSD小于15%,均满足标准,精密度符合规定;六次独立重复实验所得四参数拟合曲线的相关系数R达到标准要求,均大于0.99,线性符合规定;五个不同起始浓度的成品检测结果回收率均在85%-115%之间,准确度符合规定。综上所述,该方法适用于替奈普酶相对结合活性的检测。同时,对该方法与原活性检测方法气泡法进行了对比,结果表明,底物显色法的线性与重复性均优于气泡法。