论文部分内容阅读
背景与目的肺癌是全球范围内肿瘤患者死亡的首要原因,是最常见和致死率最高的恶性肿瘤。随着我国人民生活方式的改变和工业现代化的进展,肺癌在我国的发病率及死亡率呈逐年上升趋势,对人民健康产生极大威胁。根据WHO分型,肺癌可分两类,非小细胞肺癌(Non-small cell lung cancer,NSCLC)和小细胞肺癌。其中非小细胞肺癌约占肺癌的80-90%,早期患者以手术治疗为主,但术后复发率高,且晚期患者5年生存率低。因此,探寻新型有效的肺癌生物标志物可以提高肺癌患者的诊断、治疗和预后。长链非编码RNA(long non-codingRNA,lncRNA)是一类长度大于200个核苷酸且没有编码蛋白质和肽能力的RNA,可与多种生物分子发生作用,参与蛋白翻译调控、RNA编辑、表观遗传学修饰以及转录调控等,在肿瘤增殖、侵袭和迁移等过程中发挥重要作用。lncRNA可参与疾病发生发展过程,包括肿瘤,可作为潜在的肿瘤标志物辅助肿瘤临床诊断和患者预后判断。本课题拟探讨lncRNA RP11-79H23.3对非小细胞肺癌增殖、迁移和侵袭功能的影响,利用Real-time PCR、CCK8细胞增殖实验、平板克隆形成实验、transwell细胞迁移和侵袭实验及Western blot等方法揭示RP11-79H23.3对非小细胞肺癌细胞功能的调控作用,为非小细胞肺癌的临床诊断和治疗提供新指标和新靶点。方法1.Real-time PCR检测22对非小细胞肺癌组织和癌旁组织中RP11-79H23.3表达。2.利用lipofectamine2000脂质体转染法瞬时转染RP11-79H23.3 siRNA进人非小细胞肺癌细胞系A549和H1299,Real-time PCR验证瞬时转染效率,CCK8细胞增殖实验和平板克隆形成实验检测下调RP11-79H23.3后对A549和H1299细胞增殖的影响。3.利用lipofectamine2000脂质体转染法瞬时转染RP11-79H23.3 siRNA进人非小细胞肺癌细胞系A549和H1299,细胞划痕实验和transwell细胞迁移和侵袭实验检测下调RP11-79H23.3后对A549和H1299细胞迁移和侵袭的影响。4.将RP11-79H23.3 siRNA和NC用lipofectamine2000瞬时转染入人非小细胞肺癌细胞系A549和H1299,Western blot实验检测下调RP11-79H23.3后对A549和H1299细胞中基质金属蛋白酶(MMPs:MMP2和MMP9)及基质金属蛋白酶抑制剂(TIMPs:TIMP1和TIMP2)表达的影响。结果1.Real-time PCR分析22对非小细胞肺癌组织和癌旁组织中RP11-79H23.3表达,结果显示:非小细胞肺癌组织中RP11-79H23.3的表达显著降低,差异具有统计学意义(P<0.01)。2.CCK8细胞增殖实验和平板克隆形成实验结果显示:与对照组(Negative control组和Control组)相比,A549和H1299低表达RP11-79H23.3组(RP11-79H23.3siRNA)细胞的增殖能力和平板克隆形成能力明显增强,差异具有统计学意义(P<0.001)。3.细胞划痕实验和transwell细胞迁移和侵袭实验结果显示:与对照组(Negative control组和Control组)相比,低表达RP11-79H23.3组(RP11-79H23.3siRNA)细胞的迁移和侵袭能力明显增强,差异具有统计学意义(P<0.001)。4.Western blot实验结果显示:与对照组(Negative control组和Control组)相比,低表达RP11-79H23.3组(RP11-79H23.3 siRNA)细胞中MMP2和MMP9的表达明显升高,而TIMP1和TIMP2的表达明显降低,表明RP11-79H23.3 siRNA可通过增强MMP2/9的表达促进非小细胞肺癌细胞的转移功能,差异具有统计学意义(P<0.001)。结论1.lncRNA RP11-79H23.3在非小细胞肺癌组织中表达明显降低,表明RP11-79H23.3是非小细胞肺癌潜在的抑癌基因。2.RP11-79H23.3 siRNA可通过调控MMP2/9和TIMP1/2的表达影响非小细胞肺癌细胞的生物学功能。3.抑制lncRNA RP11-79H23.3表达可以促进非小细胞肺癌的增殖、迁移和侵袭,促进MMP2/9表达,提示其是非小细胞肺癌临床诊治潜在的新指标和新靶点。