论文部分内容阅读
本文从体内、体外两个方面研究白花蛇舌革及其活性成分对肉鸡免疫力的调节作用,并将其与IBD疫苗联合应用,评价其对疫苗保护效果的影响。
首先,对白花蛇舌草中粗多糖和总黄酮进行了提取和含量测定,其中粗多糖的提取采用常规的热水浸提—乙醇沉淀法,苯酚—硫酸法测定含量,并通过正交试验,对多糖的提取工艺进行了优化和改进,最后确定浓缩温度为65℃,所用乙醇浓度为95%,醇沉时间为24h,此时多糖得率最高,为7.12%。而总黄酮采用80%的乙醇索氏提取,亚硝酸钠—硝酸铝—氢氧化钠显色法测定含量,测得广西地区白花蛇舌草中总黄酮含量为1%左右。
然后,通过MTT染色法测定发现白花蛇舌草水煎剂、粗多糖和总黄酮三种物质均能直接刺激肉鸡淋巴细胞的增殖,其中白花蛇舌草水煎剂在浓度为4mg/ml和200~800μg/mL分别对鸡血液淋巴细胞和脾脏淋巴细胞具有明显的刺激作用。而白花蛇舌草粗多糖对鸡血液淋巴细胞和脾脏淋巴细胞有刺激作用的最佳浓度分别为1~2mg/mL和10~1600μg/mL。白花蛇舌草总黄酮在50μg/mL时,对肉鸡血液淋巴细胞和脾脏淋巴细胞的增殖作用最佳,这三种药物的作用并不是依赖于ConA和LPS等促分裂原而存在,但在某种程度上又与ConA和LPS有一定的协同增殖作用。
在鸡8日龄进行体内试验,按预定剂量连续给药10天,然后在鸡传染性法氏囊病的易感期25日龄时用法氏囊中等偏强毒力疫苗MB株加倍量免疫,造成鸡不同程度的的免疫抑制后观测各项指标的变化。试验结果表明:
1.24日龄前,给药各组在体重方面比各对照组有明显的优势,尤其是粗多糖组,但免疫抑制后,这种差异逐渐消失。
2.在细胞免疫功能方面,各给药组尤其是水煎剂组和黄酮组在一定程度上能对抗免疫抑制引起的细胞增殖能力和细胞因子IL—2和INF—γ的含量的下降,免疫抑制作用消失后能较快的恢复。
3.免疫器官指数方面,免疫抑制各组鸡的法氏囊指数在免疫抑制后出现急剧的下降,各给药组能够在下降之后更快的恢复至正常水平。
4.ND抗体水平方面,水煎剂组产生抗体明显早于其他各组,各给药组在整个试验期内都显著高于免疫抑制对照组。
5.在血液生化指标方面,各组在谷草转氨酶、乳酸脱氢酶和碱性磷酸酶的含量上基本无明显的差异,但免疫抑制组鸡谷丙转氨酶的含量有明显的升高,喂药各组在总蛋白、白蛋白和免疫球蛋白含量上比对照组有明显的优势。
最后,进行鸡传染性法氏囊病人工感染的预防试验,通过设立给药+免疫+攻毒组、免疫+攻毒、不免疫+攻毒等一系列的对照,发现白花蛇舌草水煎剂组鸡产生抗体早,保护率为100%,多糖组和黄酮组的保护率也明显高于疫苗对照组。