LncRNA UXT-AS1在结直肠癌中的表达及对细胞凋亡的影响

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背景:  结直肠癌是目前威胁人类健康的主要恶性肿瘤之一。尽管通过筛查提高早期诊断率及治疗手段的进步,结直肠癌的诊治效果有所改善,但其死亡率仍然居高不下。影响结直肠癌的疗效因素众多,其中对肿瘤的发生发展机制还远不够明了,进一步加强对结直肠癌疾病进展机制的研究是提高患者治愈率的关键。近年的研究表明,长片段非编码核糖核酸(LncRNAs)在结直肠癌的发生、发展过程中具有重要的调控功能,起着癌基因或抑癌基因的作用,也与结直肠癌的进展有密切的关系,基因芯片技术可以发现一些表达差异的LncRNAs,有望为进一步研究结直肠癌的发病和进展机制及治疗手段提供新思路。  目的:  1.通过基因芯片筛选出结直肠癌组织及癌旁组织中表达差异的LncRNAs。  2.实验研究UXT-AS1在结肠癌细胞株及结肠正常上皮细胞株中的表达水平。  3.探讨UXT-AS1在结直肠癌组织和癌旁正常组织中的表达水平及其与结直肠癌临床病理特征的关系。  4.探讨沉默和过表达UXT-AS1对结肠癌细胞增殖及凋亡的影响。  材料与方法:  材料:  人类大肠正常上皮细胞株(CCD841)及结直肠癌细胞株(HT26、HCT116、SW480)获赠于广州医科大学化学致癌研究所。  人体结直肠癌标本(37例)来源于2015年8月至2016年8月的广州医科大学附属肿瘤医院胃肠外科标本库,其术后均病理证实为结直肠癌。  方法:  1.采用基因芯片筛选并分析结直肠癌组织和癌旁正常组织中差异表达的LncRNAs。  2.运用定量逆转录-聚合酶链反应(qRT-PCR)方法检测UXT-AS1在结直肠癌细胞株(HT26、HCT116、SW480)及大肠正常上皮细胞(CCD841)中的表达水平。  3.运用qRT-PCR方法检测37例结直肠癌和癌旁正常组织中UXT-AS1的表达水平,并探讨其表达水平与临床病理特征的关系。  4.建立沉默及过表达UXT-AS1的细胞模型,分析其对细胞增殖及凋亡的影响。  结果:  1.基因芯片检测结果,5例结直肠癌组织中表达差异的LncRNAs共5751个(P<0.05,结直肠癌组织较癌旁正常组织表达量2倍或2倍以上),其中表达上调的LncRNAs2310个,表达下调的LncRNAs3441个。选择表达量高且差异在2倍以上LncRNAs大批量筛选。结果UXT-AS1在结肠癌组织的表达水平增高是癌旁正常组织2.144倍(P<0.010)。  2.相对正常结肠细胞比较,UXT-AS1在结直肠癌细胞株HT26、HCT116、SW480中的表达增高。相对表达倍数(2-ΔΔCt)分别为2.375±0.089,1.622±0.188,2.607±0.135(P<0.001)。  3.37例结直肠癌患者癌组织中UXT-AS1的相对表达量高于癌旁正常组织(P<0.05),其表达水平与结直肠癌的肿瘤大小、pTNM分期(Ⅰ/Ⅱ、Ⅲ/Ⅳ)显著性相关(P<0.05),而与性别、年龄、无显著性相关(P>0.05)。  4.沉默UXT-AS1使结肠肿瘤细胞HCT116增殖能力下降(Fold change=0.652±0.068,P<0.05),凋亡水平升高。过表达UXT-AS1使结肠肿瘤细胞HCT116增殖能力增强(Fold change=1.366±0.152,P<0.05),凋亡水平降低。  结论:  1.结直肠癌细胞组织中UXT-AS1表达水平高于癌旁正常组织。  2. UXT-AS1的表达水平与结直肠癌的肿瘤大小、pTNM分期(Ⅰ/Ⅱ、Ⅲ/Ⅳ)显著性相关(P<0.05),与性别、年龄、无显著性相关(P>0.05)。  3.沉默UXT-AS1使结肠肿瘤细胞增殖能力下降,凋亡水平升高。过表达UXT-AS1使结肠肿瘤细胞增殖能力增强,凋亡水平降低。
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