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我国野生百合(Lilium.spp)资源丰富,变异广泛,蕴藏着多样的遗传信息,为杂交育种提供了宝贵的基础材料。但目前关于野生百合的研究和利用还很薄弱,因此论文以9种野生百合和部分亚洲百合、东方百合和麝香百合杂种系的栽培品种为材料,采用不同的授粉方法,进行了野生百合之间,野生百合与栽培品种之间的杂交试验。根据授粉后子房的膨大率、膨大子房在母株上维系的时间对其杂交亲和性进行了评价,同时对存在受精后障碍的组合采用子房切片、胚珠培养的方法进行了胚挽救。对获得的部分杂种后代进行了细胞学水平的鉴定。该研究对野生百合资源的保存和评价以及培育具有自我知识产权的新品种具有重要的理论和实际应用价值。主要研究结果如下:
1.试验中对课题组引种的20份野生百合资源进行了引种栽培,共有11份资源获得了开花植株;另同种不同种源的野生百合在形态及发育进程上都表现出了一定的差异。在野生百合离体再生体系的建立中发现,湖北百合(L.henryi)和岷江百合(L.regale)鳞片的适宜灭菌时间为75%乙醇30~60s+0.1%氯化汞17~18min;毛百合(L.dauricum)的适宜灭菌时间为5%乙醇30~60s+0.1%氯化汞10~12min;宜昌百合(L.leucanthum)可用收获的未成熟的种子为外植体建立组培体系,子房适宜的灭菌时间为75%乙醇30~60s+0.1%氯化汞19~20min。培养基MS+30g·L-1蔗糖+2.0mg·L-16BA+0.2mg·L-1NAA适合除毛百合以外的大部分野生百合组培苗的继代增殖培养,适宜的养球培养基为MS+80g·L-1蔗糖。
2.部分野生百合杂交亲和性的评价和杂交障碍的克服:分别在野生百合之间及野生百合与栽培品种之间进行了33个组合的杂交,共有7个组合获得了杂交后代,接种胚珠786个,获得杂种苗388株。杂交结果显示亚洲百合与卷瓣组和钟花组的野生百合有较高的亲和性;铁炮百合作为母本与百合组、卷瓣组、钟花组的野生百合有较高的亲和性,作为父本时却表现出一定的杂交障碍;东方百合与野生百合杂交时没有得到膨大的子房,表现出较为严重的杂交障碍。不同组合杂交障碍的克服:切割柱头授粉可以较好地克服母本(百合组野生百合、东方百合)柱头较长及父母本柱头长度差异较大的细叶百合为父本的杂交组合的受精障碍,如宜昌百合自交子房率由常规授粉的0上升到了66.7%,并收获了有胚种子;以细叶百合为父本的4个杂交组合,切割柱头授粉后子房膨大率都有了不同程度的提高,且有2个组合获得了有胚种子。而对于母本柱头较短(除百合组以外的野生百合及亚洲百合),且父母本柱头长度差异不大的组合适宜采用常规授粉的方法,而0.1%6-BA处理的方法对克服受精前障碍作用不大。授粉后30~40d后是进行胚珠培养的最佳时期,可有效地克服受精后障碍。
3.卷丹(L.tigrinum)小孢子母细胞减数分裂的研究:小孢子母细胞减数分裂的中Ⅰ~末Ⅱ各个时期都存在异常现象,同一根尖内细胞间甚至是同一细胞内均存在不同步现象。在终变期染色体的平均构型为11.568Ⅲ+0.414Ⅱ+0.468Ⅰ,末期Ⅰ同源染色体随机分离,多数细胞两级染色体数大致相等,用醋酸洋红染色法测得花粉生活力为66.9%,与杂交试验中卷丹×大花卷丹(L.leichtlinii var.maximowiczii)41.3%的有胚率及杂种后代染色体计数结果相照应,说明额外染色体可以通过雌配子传递给后代。而在离体萌发试验中并未观察到萌发的花粉粒,可能是由于雄配子体对额外染色体的耐受力较低造成的。
4.兰州百合(L.davidia var.willmottiae)בRenior’杂种苗最适增殖培养基为:MS+80g·L-1+0.5mg.L-16-BA+0.3mg·L-1NAA。对部分兰州百合בRenior’杂种株系以兰州百合为对照进行细胞学分析,将6个杂种株系染色体的相对长度与母本兰州百合比较,结果显示:1~3、23和24号染色体的相对长度变化较大,兰州百合4号染色体为近中着丝粒染色体,而6个杂种株系中有4个株系的4号染色体为端着丝粒染色体。6个杂种株系中都出现配对的同源染色体的染色体类型、相对长度存在差异的情况,初步判定其为真杂种。对部分卷丹×大花卷丹杂种的根尖染色体进行计数,结果表明杂种的染色体数在24~31之间。