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目的:采用持续15天慢性束缚法复合慢性疼痛刺激法建立失眠肝郁化火证大鼠模型,从动物宏观表征、生物学指标、“以方测证”三个方面进行模型检验。方法:筛选健康SD大鼠30只,随机分为空白组、模型组和治疗组,每组10只。模型组和治疗组大鼠采用慢性束缚法(限制性制动)复合慢性疼痛刺激法(夹尾刺激)连续造模15天。在造模及其行为学检测结束后,治疗组采用龙胆泻肝汤合朱砂安神丸连续灌胃治疗5天,模型组以等量纯净水灌胃。观察大鼠一般情况、体重及摄食量,检测大鼠24小时自发活动量,进行高架十字迷宫实验、旷场实验和鼠尾悬挂实验,检测蓝斑核NET平均光密度值和血浆NE含量。结果:(1)一般情况:造模前各组大鼠睡眠良好,活动正常,反应敏捷,目光有神,目周及口唇呈粉红色,爪甲光滑,皮毛光亮色白,精神状态良好,抓取时反抗较剧;持续造模5天后,模型大鼠开始出现精神紧张,对外界反应敏感,毛发微有凌乱,束缚反抗剧烈但反应仍灵活;持续造模10天后,模型大鼠攻击性增强,易激惹,束缚时剧烈挣扎,耳尖微有干焦表现,鼻尖处黏膜及爪甲颜色暗红;持续造模15天后,模型大鼠精神高度紧张,稍有声响即成防御姿势,目光焦灼,毛发凌乱,缺乏光泽,相互撕咬及攻击次数明显增加,束缚及抓取时挣扎剧烈,叫声尖锐,具有攻击性,耳部轮廓处干焦,鼻尖黏膜及四肢指尖发红,大便微有稀溏。(2)体重增加量:持续造模5天后,各组体重增加量的差异无统计学意义(P>0.05);持续造模10天后,与空白组相比较模型大鼠在此5天内的体重增加量明显减少(P<0.01),模型组与治疗组之间的差异无统计学意义(P>0.05);持续造模15天后,与空白组相比较模型鼠在此5天内的体重增加量明显降低(P<0.01),模型组与治疗组之间的差异无统计学意义(P>0.05);治疗结束后,与空白组相比较模型组大鼠在5天治疗期内的体重增加量明显降低(P<0.01),治疗组大鼠体重增加量明显提高(P<0.01),接近空白组水平(P>0.05)。(3)摄食量:持续造模5天后,各组大鼠摄食量差异无统计学意义(P>0.05);持续造模10天后,与空白组相比较模型大鼠摄食量明显减少(P<0.01),模型组与治疗组之间的差异无统计学意义(P>0.05);持续造模15天后,与空白组相比较模型大鼠摄食量明显减少(P<0.01),模型组与治疗组之间的差异无统计学意义(P>0.05);治疗结束后,与空白组相比较模型组大鼠摄食量明显减少(P<0.01),治疗组大鼠摄食量明显提高(P<0.01),接近空白组水平(P>0.05)。(4)24小时自发活动量:持续造模15天后,模型大鼠白天活动量明显增多(P<0.01),模型组与治疗组之间的差异无统计学意义(P>0.05),模型大鼠夜晚活动量略有减小,但组间差异无统计学意义(P>0.05);治疗结束后,模型组大鼠白天活动量明显增多(P<0.01),夜晚活动量呈下降趋势(P>0.05),治疗组大鼠白天活动量明显降低(P<0.05),接近空白组水平(P>0.05),夜晚活动量有所上升(P>0.05)。(5)高架十字迷宫实验:持续造模15天后,模型大鼠高架十字迷宫实验OE%值、OT%值明显降低(OE%:P<0.01;OT%:P<0.05),模型组与治疗组之间的差异无统计学意义(P>0.05);治疗结束后,模型组大鼠高架十字迷宫实验OE%、OT%值明显降低(OE%:P<0.01;OT%:P<0.05),治疗组大鼠高架十字迷宫实验OE%、OT%值明显升高(P<0.05),接近空白组水平(P>0.05)。(6)旷场实验:持续造模15天,模型大鼠旷场实验中央格得分、垂直评分、修饰次数及粪便粒数均显著升高(P<0.05),模型组与治疗组之间的差异无统计学意义(P>0.05);治疗结束后,模型组大鼠中央格得分、垂直得分、修饰次数及粪便粒数均明显增多(P<0.05),治疗组大鼠中央格得分、垂直评分、修饰次数及粪便粒数均明显降低,(P<0.05),接近空白组水平(P>0.05)。(7)鼠尾悬挂实验:持续造模15天,模型大鼠的鼠尾悬挂静止时间呈增长趋势,但三组大鼠的组间差异无统计学意义(P>0.05);治疗结束后,三组大鼠鼠尾悬挂静止时间的组间差异无统计学意义(P>0.05)。(8)血浆NE含量:与空白组比较,模型组大鼠血浆NE含量显著升高(P<0.01);与模型组比较,治疗组大鼠血浆NE含量明显降低(P<0.01),接近空白组水平(P>0.05)。(9)蓝斑核NET平均光密度值:与空白组比较,模型组大鼠蓝斑核NET平均光密度值明显升高(P<0.01);与模型组比较,治疗组大鼠蓝斑核NET平均光密度值明显降低(P<0.05),接近空白组水平(P>0.05)。结论:(1)宏观表征评价和生物学指标评价显示,持续15天慢性束缚(限制性制动)复合慢性疼痛刺激(夹尾刺激)造模法可以建立失眠肝郁化火证大鼠模型;(2)采用龙胆泻肝汤合朱砂安神丸灌胃治疗,“以方测证”显示持续15天慢性束缚(限制性制动)复合慢性疼痛刺激(夹尾刺激)造模法可以建立失眠肝郁化火证大鼠模型。