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去氢甲睾酮(1-Dehydro-17a-methyltestosterone, DMT)是一种人工合成的甾醇类雄性蛋白同化激素,在临床治疗、畜牧生产和体育运动中有着广泛应用,但是DMT的残留会对人体产生一系列的毒副作用。因此,许多国家地区和国际组织已明确禁止DMT在畜牧生产和体育运动中的使用。然而受利益的驱使,非法使用和滥用现象依然存在。为确保动物食品安全和体育运动的公平与健康,建立和不断发展新的快速、灵敏的DMT检测方法显得至关重要。目前DMT的检测,GC-MS和LC-MS是最常用的方法,但耗时、费用高而且样品预处理要求较高。实际检测中检测蛋白同化激素要求快速、简单、费用低和高通量。而免疫分析技术恰恰具有灵敏度高、特异性强、操作简便快速、测试费用低等优点,适合大量样品的快速检测。本研究主要内容和结果如下：1.将DMT月亏化后引入羧基,并采用薄层层析和红外光谱法进行了鉴定。采用活化酯法,将肟化后的DMT小分子偶联到BSA、OVA和KLH三种蛋白载体上制备了完全抗原,采用紫外光谱法进行了鉴定,其偶联比分别为BSA:20、OVA:16、KLH:352(分子量按106计)。2.以DMT-OVA和DMT-KLH免疫兔子,成功制备了两种DMT的多抗,并建立了DMT多抗间接非竞争ELISA法,其基本参数为：DMT-BSA包被浓度为0.25μg/mL,37℃包被1h；封闭液为2%Gly,37℃封闭2h；一抗、二抗的反应条件为37℃2h; HRP-IgG稀释倍数为10000倍,37℃显色10 min,显色液中H202浓度为1μL/mL。通过建立的ELISA方法测得两种多抗的效价分别为1：256000(OVA-DMT)和1:64000 (KLH-DMT),IC50分别为5.29μg/L和0.24μg/L,最低检测限(IC15值)分别为0.12μg/L和0.01μg/L。两种血清与TP和TB的交叉反应率均小于0.68%,有很好的特异性。通过对照两种多抗的性质参数,选用能产生灵敏度高的多抗的DMT-KLH进行单克隆抗体的制备。3.通过DMT-KLH免疫Balb/C小鼠,利用阳性血清建立了筛选单抗的间接非竞争ELISA法,其基本参数为：DMT-BSA包被浓度为1μg/mL,37℃包被1h；封闭液为2%Gly,37℃封闭3 h；一抗、二抗的反应条件为37℃2h; HRP-IgG稀释倍数为5000倍,37℃显色15 min。4.通过PEG法进行细胞融合,利用建立的ELISA方法筛选,获得了能稳定分泌抗DMT抗体的单克隆杂交瘤细胞株1D6F10B4,亚型鉴定为IgG1,其IC50值为7.57μg/L,最低检测限(IC15值)为0.30μg/L,与结构类似物TP、TB的交叉反应率均小于1%。纯化后单抗的效价为1：32000,浓度为0.868 mg/mL,亲和常数为5.53×109L/mol。