环氧化酶-2抑制剂联合无环鸟苷抑制Ⅰ型单纯疱疹病毒复活的实验研究

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目的:单纯疱疹病毒性角膜炎(HSK)是一种反复发作的致盲性疾病。高危人群中,预防性的使用抗病毒药物治疗可以减少约40%的复发率,而长期的抗病毒治疗不仅花费大而且会出现病毒的耐药。实验和临床研究发现,前列腺素(PG)在Ⅰ型单纯疱疹病毒(HSV-1)复制和激活过程中起到一定的作用,而环氧化酶(COX)是前列腺素合成的限速酶,因此可以通过抑制环氧化酶来抑制前列腺素的合成,进一步的抑制了HSV-1的激活和复制。直接使用非特异性前列腺素抑制剂—阿斯匹林可阻止病毒的复活,而使用选择性环氧化酶-2(COX-2)抑制剂“赛来昔布—西乐葆(Celecoxib)”可间接抑制前列腺素的合成,达到抑制HSV-1复活的目的。本实验的目的是证实腹腔内注射选择性COX-2抑制剂—可赛风(Xafon)阻止小鼠HSV-1复活的能力,以及观察联合无环鸟苷眼液点眼,对COX-2抑制剂阻止HSV-1复活能力有无增强作用。 方法:对90只雌性ICR小鼠双眼角膜上皮“十”字划伤后接种HSV-1病毒株,建立原发HSV-1感染的模型。感染30天后,于感染组和对照组的小鼠腹腔内注入可赛风,0.008mg,每天1次;用无环鸟苷眼液点小鼠双眼,每天6次,至紫外线照射后第一天停止点眼;采用波长302nm的紫外线B光(UV—B)照射小鼠双眼,诱导HSV-1复发,总照射量为170mJ/cm2,照射后2-5天擦拭角膜表面,送擦拭液于293细胞内培养,观察细胞出现病理性变化(cell pathological effects CPE)为阳性,表明有Ⅰ型单纯疱疹病毒复制,记录结果。取小鼠双侧三叉神经节培养,观察细胞病理性变化,记录结果。取小鼠眼球、三叉神经节送常规病理,HE染色光镜下观察。小鼠心脏取血,行Ⅰ型单纯疱疹病毒的酶联免疫吸附测定(ELISA)检查。 结果:一、眼表面发现病毒情况:单独或联合使用可赛风及无环鸟苷眼液组经UV—B诱导后病毒显著减少,差异有统计学意义(P<0.01):联合使用两药组与单独使用两药组之间无显著统计学差异(0.05〈P〈0.1);单独使用两药组之间无统计学差异(P〉0.05);对照组的小鼠经UV—B诱导后眼表面未出现病毒复制。二、三叉神经节感染病毒:单独或联合使用两药组小鼠,经紫外线诱导后,三叉神经节中的病毒明显减少,差异有统计学意义(P<0.01);联合使用比分别使用两药组对抑制病毒复制更有效,差异有统计学意义(P<0.05);两药单独使用组之间无统计学差异(P〉0.05);对照组未发现三叉神经节有病毒复制。三、病理表现:1、小鼠复发性单纯疱疹病毒性角膜炎的角膜裂隙灯下见:基质层浸润,新生血管生成,病理切片光镜下可见:上皮层完整,基质层高度水肿、增厚,胶原纤维排列紊乩,纤维细胞和小血管增生明显,有大量的淋巴细胞和部分中性粒细胞浸润。2、Ⅰ型单纯疱疹病毒感染小鼠的三叉神经节病理切片光镜下见:神经元细胞之间散布淋巴细胞浸润,神经元细胞周围有“嗜节”现象,胞质边聚,胞质内空泡变性。毛细血管扩张,血管内皮变性、坏死,内皮细胞消失。四、ELISA结果:Ⅰ型单纯疱疹病毒感染小鼠的血清样本和抗HSV-1阳性对照比色均显示阳性,对照组均为阴性。 结论:COX-2抑制剂通过抑制COX-2的合成来抑制前列腺素的合成,从而阻断病毒复制的某一个环节,间接阻止了Ⅰ型单纯疱疹病毒复活。联合使用无环鸟苷眼液为抗病毒作用的叠加,不能增强这种作用。
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