慢病毒载体介导Blimp1-shRNA反义基因治疗调控髓源性DC前体细胞分化的研究

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目的:慢病毒(lenti-virus)为载体介导Blimp1-shRNA转染向树突状细胞(dendritic cells, DCs)分化的骨髓原代细胞,观察转染效率、细胞生长及分化成熟情况。方法:构建Blimp1-shRNA,用慢病毒载体将此序列转染于小鼠骨髓原代细胞中并诱导向DC分化;根据转染条件将实验分为空白对照(empty-control)组、空载病毒对照(lenti-control)组和慢病毒-Blimp1shRNA (lenti-Blimp1)组;于1周内观察荧光水平以评估转染效率,观察细胞的形态变化,记录细胞的生长情况;分别于转染后72h、96h收集细胞比较各组Blimp1mRNA、蛋白的表达情况;收集转染后第7天细胞,检测CDllc+、CD86+、MHCⅡ+细胞百分比。结果:病毒侵染后第3天细胞出现荧光,lenti-control组和lenti-Blimp1组荧光表达率为30.8+4.4%、30.4+4.8%,而后荧光持续并稳定;生长曲线显示,Empty-control组细胞在培养的前3天内呈对数增长,第4天细胞数目达到峰值(2.45+0.26×106/孔),培养第6天后细胞数目略有下降(2.35+0.20×106/孔),至第8天为2.27+0.19×106/孔;lenti-control组和lenti-Blimp1组细胞在病毒侵染后,细胞增殖停滞,随后细胞数目稳定在1.69+0.39×106/孔;lenti-Blimp1组Blimp1mRNA和蛋白的水平为lenti-control组的1.3%和70.4%,为empty-control组的1.0%和74.0%;empty-control组、lenti-control组和lenti-Blimp1组中CD11c+细胞百分比为69.24+4.98%、68.56+5.86%和72.76+5.52%,而empty-control组、lenti-control组和lenti-Blimp1组中CD86+和MHCII+细胞百分比分别为51.08+4.93%、49.52+4.28%、50.20+6.01%和56.28+7.30%、69.38土4.52%、46.48+5.70%。结论:Blimp1基因的下调能够抑制DC成熟,慢病毒介导的shRNA基因治疗是调控髓源性DC前体细胞Blimp1基因的有效手段。
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