论文部分内容阅读
水稻(Oryza Sativa L.)的穗顶退化对水稻产量有较大影响,具有较高研究价值。目前为止,水稻穗顶退化的分子机理研究较少,也未形成相应的分子调控网络。所以对穗顶退化的分子遗传机制的研究具有较大意义。在本论文中,我们利用甲基磺酸乙酯(EMS)诱变籼稻杂交骨干亲本宜香1B得到一份穗顶端退化的突变体并命名为paa65(panicle apical abortion 65)。经遗传学分析推测该性状受水稻基因LOCOs02g07960调控,具体研究结果如下:1.突变体paa65的表型分析表明,paa65穗部顶端颖花和枝梗退化,退化率为50%;穗长、每穗结实率均显著低于野生型。2.遗传分析表明:突变体paa65的穗退化性状由隐性单基因控制,经初步定位,将基因定位于2号染色体RM12368和RM5622之间。经全基因组测序,在2号染色体RM4355和RM5622之间有两个index值为1的候选基因。经基因敲除验证推测,paa65穗顶端退化由LOCOs02g0796突变引起。LOCOs02g07960第4外显子上发生了由G到A的碱基突变,导致翻译提前终止。3.在突变体穗长分别为12cm和16cm时取幼穗横切面石蜡切片观察发现,12 cm时野生型小穗和paa65小穗并无明显差异,在16 cm时paa65小穗横切面轮廓萎缩。对花器官观察发现,在开花前10天左右paa65花器官皱缩枯萎。对不同时期的花粉进行碘化钾(I2-KI)染色表明,paa65无可育花粉粒。4.细胞学检测表明paa65退化部位有大量的ROS积累并发生细胞程序性死亡。并且穗顶端退化的表型是由多种不同的激素水平差异调控产生的。5.在12 cm以后即穗在表型上出现退化的时间点,LOCOs02g07960在穗中表达尤其高,随着穗部逐渐成熟出现表达高峰。通过表达谱分析LOCOs02g0796在野生型中是组成型表达,推测LOCOs02g0796在穗发育中起到一定调节作用。6.在田间进行分期播种,在不同日均温气候条件下,调查穗退化情况结果显示,当孕穗期温度越高则退化率越高,说明LOCOs02g07960调控退化表型与环境温度有关,且高温诱导会加重穗退化表型。