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猪繁殖与呼吸综合征于1987年最早在美国发现,1996年我国也发现该病,现在已成为全世界流行最广的猪病之一,给猪养殖业造成巨大损失,所以对该病的诊断与预防显得尤为重要。该病的诊断方法很多,抗体检测方法有EILSA、IFA、IPMA、 SVN,抗原检测方法有PCR、实时荧光定量PCR。与其他方法做比较,ELISA方法更容易操作,用时短,敏感,适合用于进行流行病学调查和疫苗免疫效果的评价。PRRSV为有囊膜的单股正链RNA病毒,属于动脉炎病毒科动脉炎病毒属的成员,基因组大小约为15kb,包括5’端非编码区(Untranslated region. UTR),9个开放阅读框架(ORFla, ORFlb. ORF2a. ORF2b, ORF3-7),和3’端UTR。其中ORF1编码病毒依赖RNA的RNA聚合酶,ORF2a-7编码6个膜相关蛋白(GP2a, GP2b, GP3, GP4, GP5, M)和核衣壳蛋白N。囊膜蛋白(E)又称GP5蛋白,具有良好的抗原性和免疫原性,分子量约25kDa。研究表明GP5蛋白能刺激机体产生中和抗体,且中和抗体出现之后,抗血清主要识别E蛋白。此外,E蛋白还具有诱导细胞凋亡、参与病毒粒子结合病毒受体的过程等作用。因此,GP5蛋白在PRRSV的致病性、诊断、预防与控制等方面具有重要意义,是研制基因工程疫苗的最有力的候选基因。本实验成功构建了pGEX-6P-1-GP5原核表达载体,并利用大肠杆菌表达系统使目的蛋白高效表达,得到大小约为42kDa的重组蛋白,进一步纯化目的蛋白,纯化后的重组GP5蛋白具有反应原性。以重组GP5蛋白为包被抗原,建立了检测PRRSV血清抗体的ELISA试剂盒。对试剂盒进行了符合研究,比较GP5-ELISA和IDEXX试剂盒的检测结果,免疫血清符合率为98.67%,感染血清符合率为94.1%,表明PRRSV血清抗体检测试剂盒具有很高的敏感性和特异性。