软骨是细胞组成很单一的一种组织，具有很强的抗压、抗撞击能力。由于没有血管分布，软骨组织几乎丧失了自我修复能力。而鹿茸软骨是一种非常独特的软骨组织，它不仅在自然条件下能够自我修复、再生，而且每年以一种惊人的速度再生。鹿茸季节性再生的特性使其成为研究器官及肢体再生基本过程的一个极具潜力的天然医学模型。前期研究发现 CGI99基因在鹿茸软骨柱中高度表达（未发表），而在鹿茸的其他部位如血管中则几乎不表达。因此推测其在鹿茸软骨生成中具有一定的调节作用，可能是软骨发生过程中重要的调控分子，但目前CGI99基因在鹿茸软骨生成过程中的具体作用机理还不清楚。研究表明，鹿茸的发生起始于生茸区骨膜(Antlerogenic Periosteum，AP)，是依赖干细胞的过程，故本实验以鹿茸生茸区骨膜细胞中的CGI99基因为研究对象，在离体条件下初步探讨该基因在鹿茸软骨发生中的作用。　　首先，针对 CGI99基因序列，设计并筛选高分 RNAi靶序列，同时设计一对阴性对照序列，将对应的 shRNA序列化学合成后退火并连接，构建重组载体质粒 pLVTHM；通过 PCR对重组质粒进行阳性克隆筛选并通过测序进一步鉴定，使用三质粒系统(pLVTHM、pSPAX2、pMD2.G)共转染293t细胞得到慢病毒粒子；用慢病毒颗粒感染 AP细胞，培养出可稳定传代的细胞系，通过RT-PCR及Western-Blot从基因及蛋白水平检测沉默效率；通过MTT实验检测CGI99基因沉默对AP细胞增殖影响；对稳定的AP细胞系进行微粒体培养，将成活的微粒体制作石蜡切片，染色后观察切片中细胞团的生长分化趋势；提取微粒体总 RNA并反转录为 cDNA，通过 RT-PCR检测软骨标志性基因CollagenⅡmRNA的表达情况，以鉴定微粒体中的软骨分化趋势。　　结果显示，本实验通过筛选成功获得了1条梅花鹿CGI99基因的高分RNAi靶序列，PCR及测序鉴定结果表明，成功构建可重组质粒 pLVTHM；通过三质粒共转染系统，成功获得了重组慢病毒粒子；被重组慢病毒感染的AP细胞表达绿色荧光蛋白，RT-PCR结果显示，干扰效率达到70.8％，成功干扰了CGI99 mRNA在AP细胞中的表达；Western-Blot结果显示，实验组AP细胞中CGI99蛋白明显减少；MTT实验中三种细胞得出的数据，绘制曲线后基本趋于一致，说明CGI99基因的沉默不会影响AP细胞的增殖；通过微粒体培养实验成功获得了肉眼可见的致密球形微粒体；微粒体切片后染色结果显示，实验组微粒体软骨发生趋势微弱，与阴性对照组及未感染的空白对照组对比差异显著，后期针对CollagenⅡ基因进行的RT-PCR实验结果也证实了这一点。　　本实验以AP细胞中的CGI99基因为研究对象，基因沉默后发现该基因对软骨的生成起到了一定的抑制作用，初步认为该基因在调控软骨发生、生长及分化方面有一定的作用，可能是 AP细胞向软骨细胞分化的关键因子，但其在软骨发生等方面的具体机制还有待于继续研究。