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目的:人根尖牙乳头干细胞（stem cells from apical papilla,SCAP）是牙根发育及再生过程中的重要种子细胞。本研究运用酶消化法结合组织块贴壁法从人年轻恒牙根尖部的牙乳头组织将其进行分离培养,并对其进行干细胞特性鉴定,进而检测不同浓度氢氧化钙（calcium hydroxide,CH）对其增殖的影响,为临床上应用CH提供实验依据。方法:收集正畸治疗需要拔除的完整健康的前磨牙及阻生的第三磨牙,钝性分离根尖部牙乳头组织,运用酶消化法结合组织块贴壁法从人年轻恒牙根尖部的牙乳头组织里培养出人原代SCAP,并用有限稀释单克隆获得纯化的SCAP,龙胆紫染色检测细胞克隆形成情况,MTT法检测细胞在第1、3、5、7、9d的OD490nm值并将结果绘制成生长曲线;运用流式细胞术检测SCAP表面特异性标志物STRO-1、CD146、CD90、CD45的表达以判断其是否为间充质干细胞;运用矿化诱导液及成脂诱导液分别在体外培养SCAP,矿化培养2w和4w后分别行ALP染色和茜素红染色,成脂培养3个循环后行油红-O染色,以证实其多向分化潜能。取冻存的第4代SCAP,复苏传代计数后接种于96孔板,饥饿24h后更换为含0.1%、0.5%、1%、5%、10%、15%CH浸提原液的α-MEM完全培养基培养,每组设6个复孔,重复3次。在第1、3、5、7、9d分别停止对SCAP的培养,用MTT法检测其OD490nm值。结果:1、运用酶消化法结合组织块贴壁法培养从人年轻恒牙根尖部分离下来的牙乳头组织,3d后在倒置显微镜下能够见到贴壁的组织块周围有短梭形样细胞长出,体积较小,形态比较均一,并且环绕组织块表现为放射样生长;对原代SCAP进行有限稀释法单克隆纯化,收集传代后的细胞形态特征基本一致,较小,呈短梭形,胞体比较饱满,生长能力强,表现为成纤维样细胞的形态特点;SCAP克隆形成实验有明显的细胞集落形成,克隆形成率为20.96%;将MTT法所得结果绘图后得到呈“S”形的SCAP生长曲线图;流式细胞仪分析检测得到所分离培养出的SCAP表达STRO-1、CD146和CD90,比率分别是15.69%、54.06%、99.93%,不表达CD45;SCAP在矿化诱导液体外诱导2w后,ALP染色见胞浆呈蓝紫色,诱导4w时,茜素红染色见红色矿化结节形成;成脂诱导液体外诱导3个循环,油红-O染色见红色脂滴;各组细胞在第1,3d测得的OD值均无明显差异（P>0.05）;到第5d时,浓度低于5%的实验组测得的OD值略有下降,对SCAP的增殖有轻微的抑制作用,与对照组比较,差异没有显著性（P>0.05）,但高于10%的实验组测得的OD值明显低于对照组,对SCAP的增殖有明显的抑制作用,差异有显著性（P<0.05）。到第7d和9d时,各实验组测得的OD值明显低于对照组,表现出明显抑制SCAP的增殖,差异具有显著性（P<0.05）。结论:1、本实验成功分离和鉴定了人SCAP,并证实其拥有干细胞的表型特点和体外多向分化的能力,能够作为生物组织工程领域内研究生物性牙根再生的种子细胞,为牙髓血管再生术提供了细胞来源。2、CH对人SCAP增殖的影响表现为抑制作用,随着时间延长以及浓度的增高其抑制作用增强。