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调节性T细胞(Reulatory T cell, Treg),是一类具有免疫抑制功能的成熟T细胞,它抑制个体对自己或者非己抗原的免疫反应使个体获得免疫耐受,在维持免疫系统平衡方面起重要作用。Treg不仅可以自然发生,也可以在体内外诱导获得,并应用于临床治疗自身免疫病、移植物抗宿主病(GVHD)等疾病。目前研究较为广泛的是CD4+Treg,而CD8+Treg由于其强大的免疫抑制功能而受到越来越多的关注。现有的CD8+Treg因诱导方法繁琐、收获细胞数量有限而无法大规模应用于临床治疗,因此体外便捷高效诱导扩增CD8+Treg细胞具有重要的意义。本文通过免疫磁珠分选出CD8+T细胞,在anti-CD3/28磁珠与外源性IL-2激活下,联合使用不同组合的TGF-β、雷帕霉素(rapamycin、 RAPA)和全反式维甲酸(all-trans retinoic acid, ATRA)诱导因子,多克隆诱导扩增出三组CD8+Treg细胞。通过对三组CD8+Treg细胞扩增数量、表型、细胞内因子分泌情况分析得出CD8+T-t+r组(联合TGF-β和RAPA诱导组)细胞扩增效率较高,分泌较少的炎性因子IL-2和IFN-y、表达较多的抑制性细胞因子IL-10和TGF-p.对细胞抑制功能、稳定性的检测表明：CD8+T-t+r组细胞具有较强的抑制能力、在炎性环境中能够维持Treg属性,不发生Treg向炎性细胞转化。本研究建立的体外多克隆诱导扩增CD8+Treg方法便捷、高效,获得的Treg细胞能够及时进行同种异基因输注,这为临床应用提供了可能。CD8+T-T+R组细胞高表达CD103、Foxp3,因而为CD8+CD103+Foxp3+Treg,本文还对其免疫调节机理做了初步探究。实验结果表明：CD8+CD103+Foxp3+Treg不具有杀伤功能,能够抑制CD4+效应T细胞活化,包括抑制Zap70磷酸化以及细胞膜上CD25表达；其对靶细胞增殖的抑制功能部分依赖于与靶细胞竞争性消耗IL-2。对CD8+CD103+Foxp3+Treg免疫抑制机制的初步研究为进一步探明CD8+Treg复杂的作用方式奠定了基础。