γ-癸内酯(y-Decalactone, GDL)被认为是安全的食品添加剂,具有奶油、椰子和桃子等香气,广泛应用于食品、药品和日化用品中。本论文以解脂假丝酵母Yarrowia lipolytica的单倍体尿嘧啶缺陷菌株为出发菌株,分别敲除POX3和GUT2基因构建工程菌,以蓖麻油作底物发酵生产GDL。以Yarrowia lipolytica野生型酵母基因组DNA为模版,PCR扩增尿嘧啶合成关键基因Ura3,作为敲除组件的标记基因。以出发菌株Yarrowia lipolytica尿嘧啶缺陷型酵母基因组DNA为模版,PCR扩增POX3基因的上下游序列做同源臂,以质粒pSP72做载体构建敲除组件。通过电击转化的方法将线性化的敲除组件导入到酵母细胞中,敲除组件和目的基因发生同源重组敲除掉POX3基因。利用5-FOA培养基诱导酵母细胞基因组中的敲除组件发生二次重组,敲除标记基因Ura3,实现标记基因的重复利用。实验筛选得到发酵GDL能力较高的转化子POX-T5,实验结果表明其发酵能力可达到3.373g/L,是出发菌株的2.53倍。以相同的方法敲除GUT2基因,同样以Ura3作为标记基因,PCR扩增基因片段构建敲除组件。将GUT2敲除组件通过电击转化导入出发菌株Yarrowia lipolytica尿嘧啶缺陷型酵母中,通过两次筛选得到发酵能力较高的转化子GUT-T1,实验结果表明其发酵能力较出发菌株提高了30.5%。最后将GUT2敲除组件通过电击转化的方法导入到转化子POX-T5的细胞中,实现在同一菌株中利用相同的标记基因敲除两个基因,并且不会引入外源基因。后续实验会在转化子中筛选生产GDL能力较高的菌株,优化发酵条件进一步提高产物产量。