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胆红素(Bilirubin)是动物体内胆色素的主要成分之一，胆红素具有很高的药用价值，具有镇静、抗惊厥、解热、降压、抗病毒、抗癌和促进红细胞新生等作用，同时也是合成人工牛黄的一种必需成分。目前，胆红素的制备主要是通过钙盐法、水解还原法、离子交换树脂法和直接提取法。但这些方法仍存在着许多不足之处。 而利用胆绿素还原酶(Biliverdin reductase，BVR)可将胆绿素还原生成胆红素的机理，以血液为原料制备胆红素的研究已成为人们关注的焦点。本研究利用基因工程技术，根据黄牛、马和东北虎BVR基因的cDNA序列设计引物，通过3和5RACE方法获得延边黄牛胰脏的BVR基因全长cDNA序列。以延边黄牛胰脏的总RNA为模板，通过RT-PCR技术获得编码BVR蛋白的开放阅读框。之后将BVR编码框片段与表达载体pET-28a连接，构建pET-28a-BVR重组质粒，并在E.coli BL21(DE3)中进行了表达。结果表明，成功获得了BVR基因的3和5 RACE产物，并通过3和5RACE产物的拼接技术，成功获得了延边黄牛BVR基因的cDNA序列及编码BVR蛋白的完整开放阅读框。BVR的cDNA序列开放阅读框由891个核苷酸组成，共编码296个氨基酸。用BLAST和ClustalW软件进行同源性分析，与牛、马和东北虎的核苷酸相似性分别为98.0％、88.0％和87.0％。酶切结果证明，我们成功构建了pET-28a-BVR重组质粒。SDS-PAGE凝胶电泳结果初步判定BVR基因在E.coli BL21(DE3)中成功进行了表达并测定其分子量为32.56 kDa。Western blot结果进一步证实BVR基因在E.coli BL21(DE3)中成功进行了表达。分光光度法结果表明BVR具有催化胆绿素还原为胆红素的活性。 本研究成功的在原核宿主中进行BVR酶能大量表达，获得足够的可用于胆红素制备的BVR基因工程酶，从而为胆红素的进一步大量制备提供一个前期工作基础。