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背景与目的脑卒中是目前世界范围内致死致残的主要原因。其中,脑出血(intracerebral hemorrhage, ICH)占每年新发脑卒中病例的20%左右,具有较高的死亡率和致残率。除了血肿本身造成的压迫性损伤之外,ICH后血肿周围血脑屏障的破坏导致了脑水肿,是导致继发性脑损伤的主要机制之一。目前,临床上仍然缺乏相关的药物对血肿周围脑组织血脑屏障进行有效保护。过氧化物酶体增殖物激活受体邮(Peroxisome proliferator activated receptor β/δ, PPAR β/δ)是细胞核信号受体家族的一员。与其他亚型相比,PPAR β/δ在脑组织中的表达水平最高。这一家族中的PPARγ业已被证明在ICH后起到神经保护作用。然而与之相比,目前针对PPAR β/δ在脑卒中之后所扮演的角色研究甚少。已有的结果表明,在缺血性脑卒中的动物模型中PPAR β/δ通过多种机制发挥神经保护作用,但对于它在ICH后的作用仍缺乏相关研究。血管生成素样蛋白4(Angiopoietin-like 4, ANGPTL4)是血管生成素和血管生成素样蛋白家族中的成员。最早针对血管生成素样蛋白4的研究发现，它能够调节脂代谢,因而被认为是一种脂肪因子。后来的深入研究发现,血管生成素样蛋白4同样能够调节血管通透性、血管新生以及炎症反应。此外,最新的研究证宴在缺血性脑窑中的动物模型中,ANGPTL4基因敲除的小鼠血脑孱障破坏显著加重。尽管这一作用的具体机制目前仍不清楚,ANGPTL4对血脑屏障的保护作用被认为主要是通过抑制下游Src的磷酸化,从而减少了内皮细胞之间连接蛋白的降解。然而,目前也缺乏ANGPTL4在出血性脑卒中的作用研究。值得注意的是,针对肿瘤侵袭性的研究发现,激活PPAR β/δ可以显著增加ANGPTL4的表达,从而达到抑制肿瘤转移的作用。反之抑制PPAR β/δ的活性可以显著降低ANGPTL4的表达。尽管如此,这一分子通路也没有在ICH的研究中被证实。因此,本研究的目的是探讨PPAR β/δ在出血性脑卒中动物模型中的作用,并深入探索下游潜在的分子机制。材料与方法本研究总共使用212只8周龄CD-1小鼠。应用自体尾动脉注射模型进行短期预后研究及机制研究,并应用胶原酶注射模型进行远期预后研究。造模后30分钟通过腹腔注射给予不同剂量的GW0742。在远期预后研究中,采用有效剂量的GW0742进行腹腔注射,每日一次并维持一周。造模前24小时经侧脑室注射ANGPTL4的小干扰RNA (small interfering RNA, siRNA)和对照RNA (scramble siRNA)。机制研究中,GSK0660和重组的ANGPTL4分别通过腹腔和侧脑室途径注射。通过双标免疫组织化学法(double immunofluorescence staining)观察PPAR β/δ和ANGPTL4在模型脑组织中不同类型细胞中的表达。通过脑水含量(brain water content)的测定和行为学的评定来评估不同剂量GW0742的疗效,并根据结果选用合适剂量用于后续研究；在机制研究中,应用免疫蛋白印记法(western blot)检测Src,磷酸化的Src (p-Src),血管内皮细胞钙粘素(VE-Cadherin),紧密连接蛋白(ZO-1, Claudin 5)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)的表达水中,并应用酶谱法(Zymography)测定MMP-9的活性。在远期预后研究中,用t迷宫(T-maze),平衡疲劳试验(Rotrod)和水迷宫(Water-maze)等行为学来评估疗效。计算小鼠脑重与体重比值,并应用苏木精一伊红染色法(Hematoxylin-eosin staining, HE)对小鼠脑组织染色观察脑室扩大情况。结果1.自体动脉血注射ICH模型造模后半小时腹腔注射GW0742 (0.5mg/kg and 1.0mg/kg),能够显著减轻ICH模型在造模后24小时及72小时的神经行为学缺失并降低患侧基底节区的脑水含量。2.造模前24小时侧脑室注射对应的siRNA可以降低ANGPTL4的表达,从而拮抗PPAR β/δ激活剂对脑水含量的降低和神经行为学缺损的改善作用。3.GW0742激活PPAR β/δ,通过ANGPTL4/Src 分子通路减少紧密连接蛋白ZO-1,Claudin 5,细胞黏附蛋白VE-Cadherin的降解,并可以减少MMP-9的表达和降低其活性,从而发挥神经保护作用。4.ICH模型后一周(胶原酶模型),通过每日一次腹腔注射GW0742(1.0 mg/kg),能够在远期改善小鼠的行为学损害,减轻脑组织萎缩及侧脑室的扩大。结论：GW0742能够高亲和力的激活PPAR β/δ,随后通过ANGPTL4/Src分子通路,降低细胞间黏附蛋白和紧密蛋白的降解,从而通过保护血脑屏障降低ICH模型患侧的脑水含量并改善神经行为学损害。本研究的结果提示PPAR β/δ可能是ICH药物治疗具有前景的一个分子靶点。