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目的：1.检测已经建立的非小细胞肺癌放射抗拒细胞系的放射敏感性。2.初步探讨PTEN/PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制剂LY294002和Rapamycin对大分割放疗的增敏作用。方法：1.体外培养A549、A549R2Gy-R和A549R4Gy-R细胞。3种细胞均接受射线照射,克隆形成实验检测照射后3种细胞增殖能力的差异；免疫荧光实验检测3种细胞放疗后24h残留的yH2AX焦点的差异。2.体外培养A549、A549R2Gy-R和A549R4Gy-R细胞。实验分组：对照组(A549、A549R2Gy-R和A549R4Gy-R细胞)、LY294002组、Rapamycin组、LY294002+Rapamycin组,给予相应的射线照射。通过克隆形成实验检测加入抑制剂LY294002和／或Rapamycin后大分割放疗抗拒细胞放疗后的增殖能力；通过免疫荧光实验检测加入抑制剂LY294002和／或Rapamycin后大分割放疗抗拒细胞24h后的yH2AX焦点数。应用SPSS17.0统计分析软件包,实验数据以均数±标准差(x士S)表示,在检验数据正态分布及方差齐性的条件下,多组间数据比较采用方差分析,各组组间差异的比较用LSD—t检验。以P值<0.05为有统计学意义。结果：1. A549R2Gy-R和A549R4Gy-R细胞放疗后增殖能力较A549细胞明显增强；A549R4Gy-R细胞的增殖能力最强。A549R2Gy-R和A549R4Gy-R细胞放疗后24h残留的yH2AX焦点数较A549细胞少(P<0.05),A549R2Gy-R和A549R4Gy-R细胞之间未见统计学差异。2.加入抑制剂LY294002和／或Rapamycin后A549R4Gy-R、A549R2Gy-R细胞放疗后的增殖能力减弱。其中加入LY294002后A549R4Gy-R、A549R2Gy-R细胞放疗后增殖能力与A549细胞相似；而单独加入Rapamycin和LY294002、Rapamycin同时加入后A549R4Gy-R、A549R2Gy-R细胞放疗后的增殖能力低于A549细胞。加入抑制剂后A549R4Gy-R、A549R2Gy-R细胞照射后24h残存的yH2AX焦点数较对照组增加(P<0.05),单抑制剂组与A549对照组相比未见明显差异,而双抑制剂组较A549组明显增加(P<0.05)。结论：1.通过多次照射筛选人肺癌A549细胞的方法可以获得照射抵抗的A549细胞系。2.PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制剂LY294002或Rapamycin可以修复放射抗拒细胞系的放射敏感性,对大分割放疗起增敏作用,该作用可能与抑制放疗诱导的DNA损伤修复相关。