论文部分内容阅读
目的:研究白藜芦醇(resveratrol,简称res)对体外培养的高度骨转移性人乳腺癌细胞MDA-MB-231BO细胞增殖及体外侵袭力的作用,探讨其作用机制。并通过建立裸鼠人乳腺癌骨转移模型,通过药物的体内实验进一步验证体外实验的结果和作用机制。方法:①体外实验:选用高度骨转移性人乳腺癌细胞株MDA-MB-231BO,不同浓度res作用不同时间后,应用CCK-8法检测res对细胞生长的作用;Traswell小室检测res对细胞体外侵袭能力的影响;RT-PCR法检测细胞MMP-9基因表达;Western bolt检测细胞中NF-κB/p65蛋白的分布及MMP-9蛋白的表达,细胞免疫荧光法检测细胞中NF-κB/p65的分布。②体内实验:采用裸鼠后肢的胫骨平台注射MDA-MB-231BO细胞悬液法建立骨转移瘤模型。造模后第2天将裸鼠随机分随机分为模型组,实验组的低、高、中剂量组(res50、100、200 mg/kg),PDTC (pyrrolidine dithiocarbamate,吡咯烷二硫代氨基甲酸酯)阳性对照组,观察裸鼠的一般状况,每日测量裸鼠的摄食量和体重,定期测量肿瘤直径,描绘生长曲线;给药21天后处死全部裸鼠,取瘤组织,称重计算各组抑瘤率;免疫组织化学检测各组标本中MMP-9的表达及胞核内的NF-κB/p65表达情况;Western bolt检测细胞中NF-κB/p65蛋白的分布及MMP-9蛋白的表达情况。结果:①体外实验:res对细胞增殖有明显抑制作用,res与细胞抑制作用之间具有时间-剂量依赖性。Traswell小室检测表明,res 100μmol作用48h后细胞侵袭能力比对照组明显下降(P <0.01),res各组MMP-9的mRNA的表达均低于溶剂对照组(P<0.05),且有浓度依赖性;Westem blot结果显示res具有浓度依赖性抑制NF-κB/p65核移位(P<0.05)和MMP-9蛋白表达的作用(P<0.05)。细胞免疫荧光法检测res 100μmol作用48h后,可显著抑制细胞中NF-κB/p65向胞核内移位。②体内实验:实验组的低、高、中剂量组(res50、100、200 mg/kg),及PDTC组,的抑瘤率分别为30.11%、41.51%、55.66%及52.83%,与模型组比较具有统计学意义(P<0.01)。但各治疗组间没有显著性差异(P﹥0.05)。免疫组织化学检查示治疗组瘤组织中的MMP-9表达水平均较模型组有所降低,PDTC组、res200、res100中的MMP-9表达水平显著降低,与模型组比较有显著差异(P<0.01),res50亦可降低MMP-9的表达,其结果具有统计学意义(P<0.05);NF-κB/p65在模型组瘤组织胞核内中呈高表达,治疗组瘤组织胞核内的NF-κB/p65表达水平与模型组比较有显著差异(P<0.01),且PDTC组、res200胞核内的NF-κB/p65表达水平显著降低,与res50比较其结果具有统计学意义(P<0.05)。Westemblot结果显示res具有浓度依赖性抑制NF-κB/p65核移位并抑制MMP-9蛋白表达的作用。结论: res能够抑制MDA-MB-231BO细胞的的增殖并可显著抑制细胞的体外侵袭力,体内实验结果证明res可显著抑制裸鼠人乳腺癌骨转移瘤的生长,其抑瘤作用可能与降低MMP-9含量,抑制NF-κB/p65核移位有关。本实验初步探讨了res抑制乳腺癌细胞骨转移的可能分子机制,为未来应用res治疗乳腺癌骨转移,提供了基础实验资料。