猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome, PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)感染引起的一种猪的高度传染性疾病。临床上以妊娠母猪的繁殖障碍以及各年龄段猪,尤其是仔猪的呼吸性障碍为主要特征,给全球的养猪业造成了巨大的经济损失。因此,预防及控制PRRSV的感染和传播是目前亟待解决的问题。研究宿主细胞的信号转导网络(包括蛋白激酶C)对PRRSV感染的影响以及新型有效疫苗的探索具有重要意义。本论文分别对这两项内容进行研究。蛋白激酶C (PKC)是细胞内多种信号转导通路的重要成分,参与调控细胞的增殖、迁移、分化和凋亡等多种重要的细胞功能。近年来,大量的研究表明许多病毒能够改变细胞蛋白激酶C的活性,利用PKC信号通路调控病毒的复制。但是,PKC信号通路对PRRSV复制的影响目前并不清楚。论文第一部分发现特异性抑制剂GF109203X抑制PKC信号通路后,细胞内病毒RNA的合成减少以及病毒蛋白的表达下降,降低PRRSV感染性病毒颗粒的释放,从而显著地抑制PRRSV的复制增殖。且这种抑制作用主要发生在病毒感染的早期,包括PRRSV进入和进入后的早期复制过程,这暗示PRRSV感染的早期阶段依赖PKC信号通路。另外,在PKC的众多亚型中,新型PKC亚型PKCS参与调节PRRSV的复制,PRRSV感染猪肺泡巨噬细胞后可以激活PKCδ;而利用PKCδ的特异性抑制剂rottlerin处理细胞或PKCδ特异性siRNA干扰PKCδ的表达后,均显著抑制PRRSV的复制增殖。同时,PRRSV感染后,抑制PKC信号通路可显著下调各种细胞因子如IFN-α、IFN-β、IL-1α、IL-1β和TNF-α的mRNA水平,而抗炎细胞因子IL-10的表达在病毒感染早期却有轻微上调。这表明,抑制PKC信号通路后削弱了PRRSV的复制,不是通过上调抗病毒细胞因子的表达实现的。综合本研究的实验结果证明PKC信号通路对PRRSV复制具有重要作用,这些发现为全面认识PRRSV感染的分子机制提供了重要证据。本论文第二部分主要是针对PRRSV新型疫苗的实验室探索和研究。目前对PRRS的防治以免疫接种为主,商品化疫苗主要有灭活疫苗和弱毒疫苗。这两种疫苗的接种都能提供一定的免疫保护,但是也存在着各自的缺陷,探索有效的新型PRRSV疫苗具有重要的意义。之前的研究发现,酵母本身由于具有内在佐剂的特点,免疫机体后可以诱导良好的免疫反应而被用作疫苗传递系统。该部分主要制备了表达HP-PRRSV GP5蛋白的重组乳酸克鲁维酵母(K.lactis) Yeast-GP5;通过皮下和口服两种不同的免疫方式接种,评估Yeast-GP5在BALB/c小鼠体内诱导的免疫应答。研究发现与Yeast-vector免疫组相比,Yeast-GP5口服组诱导了更强的粘膜免疫,PRRSV特异性肠道粘膜sIgA的水平明显上调,同时诱导产生了高水平的脾脏CD4+T细胞和CD8+T细胞中IFN-γ的分泌；而皮下免疫Yeast-GP5诱导了非常强的细胞免疫反应,包括强的脾脏T淋巴细胞增殖和IFN-γ细胞因子的分泌。这些初步探索获得的结果说明重组乳酸克鲁维酵母Yeast-GP5作为一种新型的PRRSV疫苗,能够诱导一定的免疫反应,拥有一定的开发和应用价值。