柿单宁特征二聚体稳定性及其抑制3T3-L1细胞分化的活性形式探究

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前期研究发现,柿单宁具有良好的抑制3T3-L1细胞成脂分化的能力,且柿单宁特征二聚体中A型连接ECG二聚体和A型连接ECGC二聚体是其主要有效成分,但是其在细胞模型中又极其不稳定。因此研究柿单宁特征二聚体A型连接ECG二聚体和A型连接ECGC二聚体在3T3-L1细胞体系中稳定性与其抑制3T3-L1细胞成脂分化的能力非常具有必要性。鉴于细胞体系复杂性,本研究首先研究了二聚体在细胞培养基体系中的稳定性及代谢产物。随后又研究了其在细胞体系中稳定性及其在细胞中分布。最后进行了两种A型连接的二聚体抑制3T3-L1成脂分化的结构形式探究。主要研究结果如下。1.柿单宁特征二聚体在细胞培养基中稳定性柿单宁特征四种特征二聚体稳定性B型连接EC二聚体>A型连接EC二聚体>A型连接ECG二聚体>A型连接EGCG二聚体。伴随着四种二聚体在培养液中降解,均能产生一系列产物和H2O2,产生的H2O2量和代谢速率正相关。其中A型连接EC产生一种三聚体和两种同分异构。B型EC产生两种m/z 665的同分异构。A型ECG产生没食子酸。A型EGCG产生没食子酸及分子离子峰为m/z469.7、m/z905.9及m/z452.8产物。2.柿单宁特征二聚体在3T3-L1细胞体系中稳定性柿单宁特征四种特征二聚体稳定性B型连接EC二聚体>A型连接ECG二聚体>A型EC二聚体>A型连接EGCG二聚体。四种二聚体在培养液中降解均产生H2O2但是均少于在纯培养液中,产生的H2O2量和代谢速率正相关。在3T3-L1细胞中未发现任何二聚体及其产物。细胞膜上总酚A型连接ECG二聚体>A型连接EC二聚体>A型连接EGCG二聚体>B型连接EC二聚体。说明二聚体抑制3T3-L1细胞成脂分化可能是通过与细胞膜结合完成。3.两种A型连接的二聚体抑制3T3-L1成脂分化的结构形式探究SOD,VC均能极大提高A型连接ECG二聚体和A型连接ECGC二聚体在细胞体系的稳定。VC可以显著提高A型连接ECG抑制3T3-L1细胞成脂分化效果。VC,SOD均能显著提高A型连接EGCG抑制3T3-L1细胞成脂分化效果。当A型连接ECG二聚体和A型连接EGCG二聚体预先和培养基孵育后,其抑制3T3-L1细胞成脂分化效果减弱。表明A型连接ECG二聚体和A型连接EGCG二聚体是以其本身而不是其氧化产物的形式抑制3T3-L1细胞成脂分化的。
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