抗体药物具有均一的性质、较高特异性和针对特定靶点的定向制备等优势,在肿瘤免疫治疗中具有较好的临床价值。随着生物技术的发展,人源化抗体因其减少了机体的免疫排斥反应,延长体内半衰期等优点,成为抗体药物的研究重点。程序性死亡受体1（PD-1）与其配体-1（PD-L1）结合,可以使肿瘤细胞逃避免疫抑制,近年来,阻断其途径成为肿瘤治疗的新方向。PD-1/PD-L1抗体药物被证实在多种肿瘤治疗中有很好的效果。本课题组在前期的工作中完成了鼠源抗PD-L1抗体的人源化改造,获得具有活性的抗PD-L1抗体,并建立了检测方法。在前期工作的基础上,首先通过HEK 293贴壁细胞瞬时表达抗PD-L1抗体,并优化其表达条件,表达量为0.561μg/m L。由于整体表达量偏低不适合大量生产。本研究重新选择适合抗PD-L1抗体表达的宿主细胞HEK293 6E,构建抗PD-L1抗体表达载体使其更适应抗体在HEK293 6E大量表达,对表达条件进行检测。结果显示,成功构建以pTT5为载体的重链（pTT5-H）,以pTT5为载体的轻链（pTT5-L）,并在共转染细胞培养上清中有目的蛋白表达。通过筛选,发现Free Style^TMF17和A类无血清生长液更适合作为HEK293 6E细胞的生长培养基（P=0.01⁰.049）。选择A类培养基作为表达培养基,其抗体蛋白在第5天表达量最高为63.02μg/m L,明显高于1 d组（P<0.001）。检测发现,当DNA与PEI的质量比为1:1时抗体在第4天表达量最高为170.9μg/m L。当补料为5%OPM-293CD Feed时,第6天抗PD-L1抗体表达量最高为159.8μg/mL。经SDS鉴定抗体重链分子量约为50 kD,轻链分子量约为25 kD,纯度为90%,浓缩后抗PD-L1抗体浓度为3 mg/m L。对抗PD-L1抗体进行活性检测,发现表达抗PD-L1抗体活性良好,可以在后续抗体研究中满足需求。结果证明,本研究成功建立了操作便利的抗PD-L1抗体表达体系。