视觉参与小脑功能的环路结构和功能研究

来源 :昆明医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:youfei741101
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[目 的]从视网膜-小脑神经环路入手,探索视觉损伤对小脑认知功能的影响。该研究使用嗜神经病毒环路示踪的技术,对视网膜-小脑神经环路做了初步解析。通过视觉损伤模型,探讨视觉对小脑之间的神经调控关系,进一步探讨视觉损伤对小脑功能的影响。[方 法]使用220~250g健康雄性SD大鼠,在大鼠右眼玻璃体腔注射顺行跨多突触嗜神经病毒H8,研究视网膜到小脑深部核团的神经环路。将实验大鼠随机分为第3天、第4天、第5天、第6天共4个取材组,每组4只大鼠。每组按时取大鼠脑组织,进行冰冻切片。通过玻片扫描仪采集脑片图像,然后用Image J软件进行阳性细胞计数。在小脑深部核团注射retro-AAV逆行跨单突触嗜神经病毒,利用玻片扫描仪采集脑片图像,标记与视觉相关的小脑上游神经元,揭示小脑中与视觉有关的关键核团。通过免疫荧光染色检测小脑中与视觉有关的深部核团,区分神经元类型、形态学特点、和环路的关系以及神经递质类型。视觉损伤实验将48只250~280g健康成年SD雄性大鼠随机分为4组:正常对照组12只,视神经钳夹组12只,假手术组12只,眼睑缝合组12只。术前进行行为学基线测试,术后第7天、第14天和第28天进行光栅视动反射测试、闪光视觉诱发电位测试,评估大鼠视觉受损的程度;同时,术后第7天、第14天和第28天进行平衡木实验、旋转杆实验,测试视觉对小脑运动学习功能的影响。[结 果]1.H8顺行跨多突触嗜神经病毒示踪显示,大鼠右眼注射H8后可在小脑深部核团检测到被标记的神经元。2.对全脑连续冰冻切片的阳性细胞计数定量分析结果显示,与视网膜到小脑神经环路高度相关的视觉通路上的经过核团,主要为视交叉、视交叉上核、下丘脑弓状核、腹侧腱鞘、视上核、外侧隔核、隔丘脑核、视前内侧核、下丘脑背内侧核、下丘脑室旁核腹侧部、下丘脑前区、后下丘脑核、外侧膝状体、丘脑背外侧核、丘脑后外侧核、黑质、上丘、内侧膝状体核、导水管周围灰质、初级视觉皮层、次级视皮层、中间小脑脚、小脑下脚、小脑白质、小脑内侧核(顶核)、小脑间核、小脑外侧(齿状)核。3.retro-AAV逆行跨单突触嗜神经病毒示踪显示视觉调控小脑相关的上游脑区为上丘、中脑导水管周围灰质。并且,顺行、逆行嗜神经病毒标记均未通过动眼神经副核,表明视网膜到小脑的支配是通过视神经,而非动眼神经。4.免疫荧光组织化学染色结果显示,受视觉调控的小脑神经元主要是浦肯野细胞,这些神经元可以与视紫红质共定位。并且,这些神经元大多数是谷氨酸能的神经元。5.大鼠视神经压迫损伤后,视觉跟踪运动能力减弱,平衡能力、运动协调功能及运动学习能力减弱。[结 论]1.视网膜和小脑存在神经环路上的连接。2.创伤性视神经病变在一定程度上可能会导致小脑运动学习记忆功能障碍。
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