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柑橘是世界上重要的经济作物,全球有130多个国家和地区均有种植,年产量10282.2万吨,面积10730万亩,均居百果之首。我国是柑橘的重要原产地之一,柑橘资源丰富,优良品种繁多,有4000多年的栽培历史,种植区主要分布南方各地区。由地毯草黄单胞杆菌柑橘致病变种(Xanthomonas campestris pv.citri,Xcc)引起的柑橘溃疡病是危害世界柑橘产业的重要检疫性病害,对柑橘的产量和品质造成严重影响。在疾病流行的地区,多使用以喷施铜杀菌剂及链霉素类等的化学防治为主,农业措施为辅的综合管理措施。化学农药能在一定程度降低发病率。但是长期单一使用,会使病原菌产生抗药性,导致果实上农药的残留,污染环境,同时不能满足人们对绿色健康食品的要求。生物防治因对环境影响小,毒性普遍较低,不易残留等特点受到人们的广泛关注,并开展了一系列的研究工作。因此研究柑橘溃疡病的生物防治具有重要意义。本研究以脐橙叶片为材料,分离筛选对柑橘溃疡病菌有良好抑制作用的生防细菌,对其进行种属分类鉴定、发酵条件优化、对14种柑橘常用杀菌/虫剂的抗性及其在脐橙叶片上的定殖规律进行了系统研究,取得了以下研究结果:(1)采用梯度平板稀释法从脐橙叶片共分离出30株细菌。采用扩散法筛选出6株对柑橘溃疡病具有抑制效果的菌株,之后用离体叶片进一步复筛,最终得到两株对柑橘溃疡病有明显抑制作用的生防菌株QC-Y、QC-J。(2)结合形态学、生理生化特性分析和16S rDNA序列分析结果对生防菌株QC-Y、QC-J进行种属分类鉴定。鉴定结果发现,菌株QC-Y与解淀粉芽孢杆菌有100%的同源性,菌落形态、培养特性及生理生化特性等也与典型的解淀粉芽孢菌一致,最终确定菌株QC-Y属于解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。综合菌株QC-J形态学观察、生理生化测定和16S rDNA序列分析,鉴定菌株QC-J为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。(3)通过单因素实验法对生防菌株的发酵条件进行优化。菌株QC-Y对柑橘溃疡病抑菌活性最佳的发酵条件为:最佳培养基为SPA培养基,接种量2%,装液量75 mL/250mL,初始pH 8,培养时间48 h。菌株QC-J对柑橘溃疡病抑菌活性最佳的发酵条件为:最佳培养基为NYD培养基,接种量2%,装液量50mL,初始pH 6,培养时间24 h。(4)测试生防菌株对14种柑橘常用杀菌/虫剂的抗性。以大田施用浓度为参照,适当增加或降低药剂浓度。研究发现,代森锰锌对生防菌株QC-Y、QC-J均有明显抑制作用,当毒死蜱的浓度为2000 mg/L仅对QC-Y有微弱的抑制作用,而浓度为3000 mg/L时,对QC-Y、QC-J均有微弱的抑制作用;吡唑醚菌酯仅在高浓度(药液浓度为2010mg/L)时,对QC-J的生长有微弱的抑制作用。甲基硫菌灵、波尔多液、春雷霉素、吡虫啉、氨基酸、苯醚甲环唑、乙螨唑、顺式氯氰菊酯、噻嗪酮、螺螨酯、阿维菌素对菌株QC-Y、QC-J均无抑制作用。(5)运用抗生素标记法对生防菌株进行抗链霉素标记,采用叶片喷雾方法接种,平皿稀释分离培养方法测定其在柑橘叶片上的定殖情况。菌株QC-Y、QC-J均能在脐橙叶片上有效定殖,接种后第1天菌量达到最大,分别为2.413×10~5 CFU/cm~2、4.375×10~5CFU/cm~2,且都随着时间推移标记菌株在叶片定殖数量呈总体下降趋势。在接种12天后呈现稳定趋势,菌量分别为2.188×10~4 CFU/cm~2、3.281×10~4 CFU/cm~2。