猪非典型瘟病毒的流行病学调查、遗传进化及致病性研究

来源 :华南农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zhongshengxiao
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猪非典型瘟病毒(Atypical porcine pesti virus,APPV)是引起仔猪先天性震颤(Congenital Tremors,CT)的致病因子,实质是一种新型瘟病毒,于2015年首次报道。该病毒可导致新生仔猪全身节律性震颤、抖动、哺乳困难,往往会造成患病仔猪的死亡。随着APPV被首次发现以来,世界上大多数国家和我国部分地区陆续报道APPV的爆发与流行,引起了广泛关注。由于该病毒基因型种类繁多,尚缺乏快速有效的诊断方法以及防控手段,给养殖行业带来了巨大的威胁。在此情况下,对该病毒进行病原检测、遗传变异分析,掌握其流行规律和致病特点,对于未来疾病的诊断、防控和更进一步的研究意义深远。本研究运用RT-PCR对APPV的流行病学进行了调查研究,并于2016-2018年期间采集了我国不同地区(广东、广西、福建、海南、黑龙江、湖北、江西、四川、云南、浙江)疑似APPV发病的127个猪场猪的不同阶段和类型的病料样品共1367份。检测结果显示:检测猪场中APPV感染的阳性率为7.09%(9/127),所有检测样品中APPV感染的阳性率为10.90%(149/1367)。其中,广东猪场阳性率为12.50%(6/48),样品阳性率为43.62%(65/149);广西猪场阳性率为9.38%(3/32),样品阳性率为56.38%(84/149),其他省份的少量猪场暂未检出APPV。猪粪便、口鼻分泌物阳性率为4.12%(30/729),血清阳性率为7.14%(15/210),组织器官阳性率为24.30%(104/428)。通过采自3个APPV阳性猪场不同阶段猪的粪便和口鼻分泌物检测结果显示:哺乳仔猪(1-20日龄)阳性率为13.21%(14/106),保育猪(2-6月龄)阳性率为8.33%(10/120),生长育肥猪阳性率为2.48%(3/121),哺乳母猪阳性率为2.50%(3/120)。本研究筛选并获得了总共9株E2基因序列,对其进行同源性分析得出以下结果:与国内外已知APPV E2基因核苷酸序列同源性在81.6%-100%之间,但与CSFV E2基因的同源性具有较大差异。根据遗传进化树分析:与近几年发现并鉴定的APPV中国毒株属于同一个分支,有较近的亲缘关系,与CSFV毒株处于不同分支。成功扩增得到了APPV/CNGL/2017(11445 bp)、APPV/CNYJ/2018(11468 bp)2株APPV全基因组序列,与其他已知的APPV全基因核苷酸相似性在83.3%-98.3%之间。遗传进化树分析显示:与已报道中国毒株亲缘关系较近,而与国外毒株亲缘关系较远,可独立形成两个小分支。本研究对不同动物进行了APPV致病性实验。在感染KM乳鼠的脑、肝、脾、肺和肾组织通过RT-PCR检测到了病毒,在肝组织中可见肝细胞颗粒样变性,脾组织中可见脾小结中淋巴细胞点状坏死,肺组织中可见局灶性的出血,肾组织中可见局部出现少量的肾小管蛋白管型等显微病理变化。在感染APPV成年兔的血清、肝和肺组织通过RT-PCR检测到了病毒,成年兔感染后肺组织发生实质性肉变,伴有充血、淤血,在肝、肺、肾组织中可见炎性细胞浸润等显微病理变化。在感染断乳仔猪的血清、脑、心、肝、脾、肺、肾和腹股沟淋巴结组织中通过RT-PCR检测到了病毒,断乳仔猪感染后表现为体温升高,肺组织边缘呈现胰样肉变,伴有轻微水肿,在脑组织可见边缘大面积液化性坏死,神经元大量减少,心、肝、肺、肾和腹股沟淋巴结组织局部可见炎性细胞浸润等显微病理变化。利用q PCR检测断乳仔猪28 dpi的各组织平均载毒水平,测定得出感染猪的各组织中平均拷贝数值在59-113拷贝/μL之间,且肺组织的平均载毒量达到最高。
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