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近年来,高产奶牛的疾病明显增多,严重影响奶牛业的健康发展。而子宫内膜炎作为困扰奶牛养殖业的三大疾病之一,近几年发病率呈上升趋势,给奶牛养殖业的发展带来严重影响。较普遍的是由革兰氏阳性菌引起的子宫内膜炎,而脂磷壁酸(Lipoteichoic acid, LTA)是革兰氏阳性菌细胞壁中的重要组成部分。Toll样受体2(Toll-like receptor2, TLR2)是天然免疫系统识别病原微生物的主要受体,在天然免疫反应中具有重要的作用,与革兰氏阳性菌引起的子宫内膜炎密切相关。TLR2介导LTA引起的免疫应答,它识别LTA并产生应答,进一步激活转录因子NF-κB,增强炎性细胞因子表达。本试验用LTA刺激,通过体内、体外试验,观察小鼠子宫内膜组织中TLR2表达的变化,以及炎性细胞因子TNF-α、IL6的表达变化,为TLR2信号途径的研究提供一定依据。1.LTA对小鼠子宫内膜组织中TLR2和TNF-α、IL6mRNA表达的影响本试验以小鼠为试验对象,子宫内灌注LTA引起小鼠子宫内膜炎,观察子宫内膜组织病理变化；分析小鼠子宫内膜组织中TLR2表达及重要的炎性细胞因子TNF-αIL6的表达变化。选取36只雌性ICR小鼠,随机分为试验组5组和对照组一组。试验组子宫灌注不同浓度LTA；对照组灌注生理盐水,灌注12h后采集样本,组织学分析子宫内膜病理变化；对各组子宫内膜组织中TLR2和TNF-α、IL6mRNA表达变化进行分析。组织学结果表明灌注不同浓度LTA后子宫内膜组织中炎性细胞增多；通过RT-PCR对各组中TLR2和TNF-α、IL6的mRNA表达水平进行检测,发现灌注LTA能够增强TLR2和TNF-α、IL-6mRNA表达。2.小鼠子宫内膜上皮细胞体外培养方法比较为探讨适用于小鼠子宫内膜上皮细胞的培养方法,对工型胶原酶消化法、胰蛋白酶+Ⅰ型胶原酶消化法、刮取法+工型胶原酶消化法、组织块培养法、细胞团块接种培养法5种方法进行了比较研究。结果表明,Ⅰ型胶原酶消化法、胰蛋白酶+Ⅰ型胶原酶消化法获得的细胞数量较少；刮取法+Ⅰ型胶原酶消化法、子宫翻转组织块培养法所得的细胞较多,活力较强,但细胞生长较慢；细胞团接种培养法获得的上皮细胞活力强,生长速度快,纯度高,比较适宜小鼠子宫内膜上皮细胞的原代培养。3.LTA对小鼠子宫内膜上皮细胞中TLR2和TNF-α、IL6mRNA表达的影响培养原代小鼠子宫内膜上皮细胞,对数生长期的细胞融合至80%-90%时,吸去培养基,用PBS漂洗两次。将细胞分为五个试验组和一个对照组,试验组分别加入浓度为0.05μg/mL、0.1μg/mL、0.5μg/mL、1.0μg/mL、3.0μg/mL的LTA各2mL；一个对照组加入2mL DMEM。每组设6个重复孔,3h后收集细胞提取RNA, RT-PCR后分析各组TLR2和TNF-α、IL6的mRNA表达水平。试验重复五次。PCR扩增结果表明TLR2和TNF-α、IL6mRNA表达随LTA的浓度变化而变化,0.05μg/mL、0.1μg/mL的mRNA表达高于对照组,0.5μg/mL后逐渐降低且低于对照组。