浮萍总黄酮是中药紫萍的主要活性部位,具有抗癌、抗氧化、保肝等多种生理活性。有研究表明,黄酮对肿瘤坏死因子诱导的人体肝细胞和大鼠肝细胞的凋亡有抑制作用。也有报道指出,黄酮在抑制体外培养的人肝癌和卵巢癌细胞增殖方面有一定的作用,提示黄酮对肝癌可能具有一定的抑制作用,其抗肿瘤机制可能同诱导肝癌细胞凋亡有关。目前暂无关于中药紫萍活性部位诱导人体癌细胞凋亡机制的研究。本文以人肝癌细胞株(SMMC-7721)为研究对象,利用生物化学和细胞生物学的方法,主要研究浮萍总黄酮是否具有诱导肝癌细胞分化能力以及对肝癌细胞增殖、凋亡相关蛋白表达的影响,探讨浮萍总黄酮诱导肝癌细胞凋亡的作用机理。本文的主要研究方法、内容及结果如下:①用MTT法分别测定浮萍总黄酮对人肝癌SMMC-7721细胞和人正常肝细胞HL-7702的生长抑制情况。实验结果显示,浮萍总黄酮对体外培养的SMMC-7721细胞的生长有明显的抑制作用,同时对HL-7702细胞的生长也有一定的抑制作用,且均呈时间、浓度依赖性。但浮萍总黄酮对SMMC-7721细胞增殖的抑制作用要强于对HL-7702细胞增殖的影响。②用比色法测定浮萍总黄酮对SMMC-7721细胞学特性的影响。结果显示,浮萍总黄酮能够降低SMMC-7721细胞中多种代谢酶的活性,对细胞中的分化指标酶的活性无显著抑制作用。③用流式细胞仪结合PI和AnnexinⅤ染料染色分析浮萍总黄酮对SMMC-7721细胞周期的影响及诱导凋亡的情况。浮萍总黄酮能使SMMC-7721细胞周期阻滞于G2/M期和S期,使细胞不能正常进入G0/G1期,从而诱导SMMC-7721细胞凋亡,在200μg/ml的浓度下作用48h后细胞凋亡率达到了59.32%。④用流式细胞仪结合荧光(FITC)标记抗体,量化分析浮萍总黄酮对实验细胞癌相关蛋白bcl-2和p53蛋白表达的影响。结果表明,浮萍总黄酮能下调bcl-2的表达,同时上调p53的表达。