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脂肪组织是动物机体最主要的储能组织,当有机体缺乏能量时,为机体提供必要的能量。脂肪组织代谢是一个复杂而精细的调控过程,在此过程中,脂肪生成与脂肪分解都具有不可忽视作用,如脂肪生成相关酶有FAS、ACC和SCD等;脂肪分解相关酶有ATGL、HSL和TGH等,另外,对脂代谢具有分子开关作用的perilipin及其家族ADRP和TIP47对脂肪代谢也有重要调控作用。此外,脂肪细胞内转录因子(PPARγ、LXR、RXR等)和信号通路中蛋白质相互作用及作用方式也对脂肪代谢具重要作用。本试验以1-3日龄仔猪和15日龄SD大鼠为实验材料,分离培养原代前体脂肪细胞,通过油红O染色、半定量RT-PCR技术及JAK-STAT3、MEK/ERK及PPARγ特异性抑制剂和PPARγ激活剂联合Leptin处理的方法,在体外研究了脂滴相关蛋白和脂肪生成相关酶的时序表达及Leptin对perilipin、ADRP、TIP47和PPARγmRNA表达的调控,并初步探讨其分子机制。主要研究结果如下:1.利用半定量RT-PCR法检测,perilipin在皮下脂肪组织表达最高,其次是肌肉,在脾、胃、肾、肝和心脏组织均未检测到其mRNA表达;2.半定量RT-PCR检测长白猪和八眉猪皮下脂肪组织中perilipin、ADRP、TIP47、ACCα、LXRα、FAS、SCD、PPARγmRNA的表达。结果:八眉猪perilipin、SCD mRNA表达显著低于长白猪,八眉猪TIP47、FAS和LXRαmRNA表达显著高于长白猪;3.通过半定量RT-PCR法检测原代培养猪脂肪细胞2、4、6、8、10、12、14d脂滴相关蛋白和脂肪合成相关酶mRNA的时序表达。结果,随着脂肪细胞分化perilipin、ADRP、TIP47、ACCα、LXRα、FAS和SCD mRNA总体趋势是逐渐升高;4.当Leptin处理猪脂肪细胞3 h时:150 nmol/L Leptin处理perilipin mRNA表达显著降低,50和100 nmol/L Leptin处理3 h PPARγ,ACCα和FAS mRNA表达显著降低。当Leptin处理猪脂肪细胞6 h时:50和100 nmol/L Leptin处理降低perilipin、SCD、PPARγ、FAS、ACCα和LXRαmRNA表达,50,100,150 nmol/LLeptin处理显著下调ADRP mRNA表达,50 nmol/L Leptin处理6h TIP47 mRNA表达下降;5.通过JAK-STAT3信号通路的特异性抑制剂AG490 20μmol/ml、MEK信号通路的特异性抑制剂U0126 20μmol/ml、PPARγ激动剂罗格列酮(Ros)3μmol/ml和PPARγ抑制剂GW9662 10μmol/ml分别与50ng/ml leptin共同处理大鼠脂肪细胞3h,通过RT-PCR检测perilipin、ADRP、TIP47和PPARγmRNA的表达。结果发现:AG490抑制50ng/ml Leptin对大鼠脂肪细胞perilipin mRNA表达的抑制作用(P＜0.05);而PPARγmRNA差异不显著,暗示Leptin通过JAK-STAT3通路抑制perilipin mRNA的表达,但是Leptin并不是通过JAK-STAT3通路抑制PPARγmRNA表达;U0126阻断MEK/ERK通路加剧Leptin对体外培养大鼠脂肪细胞perilipin、ADRP和PPARγmRNA的表达下调作用;U0126抑制Leptin对大鼠脂肪细胞TIP47 mRNA的抑制作用(P＜0.05),抑制MEK/ERK通路抑制perilipin mRNA的表达;Ros逆转Leptin对大鼠脂肪细胞perilipin、ADRP和TIP47 mRNA的抑制作用(P＜0.05)。